JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:25 min. • September 30th, 2026
Przygotuj płytkę wielodołkową zawierającą komórki nabłonkowe ssaków.
Przygotować rozcieńczenia seryjne pseudowirusa zawierającego białka kolca koronawirusa.
W każdym dołku należy zastąpić pożywkę rozcieńczoną zawiesiną wirusową.
Inkubować, wykonując okresowe mieszanie (rocking), aby umożliwić związanie białek spike wirusa z receptorem komórki gospodarza.
Usunąć medium. Dodać medium zawierające metylocelulozę w celu utworzenia półstałej warstwy nakładki, która ogranicza rozprzestrzenianie się wirusa, a następnie inkubować.
Wirus wnika do komórki i uwalnia swój genom RNA.
RNA kieruje syntezą nowego wirusowego RNA oraz białek, które łączą się w cząsteczki wirusa opuszczające komórkę.
Uwolnione wirusy infekują sąsiednie komórki, tworząc przejaśnienia nazywane blaszkami.
Usunąć warstwę overlay i wypłukać komórki.
Dodać barwnik i inkubować płytkę przy potrząsaniu.
Przemyć i osuszyć dołki.
Barwnik barwi komórki, podczas gdy plaki pozostają przejaśnione.
Oblicz liczbę widocznych płytkarni w każdym dołku, aby określić stężenie wirusa.
Aby oznaczyć miano wirusa, wysiej komórki Vero E6 na płytki 6-dołkowe z gęstością 6 × 10⁵ komórek na dołek i inkubuj przez noc. Następnego dnia przygotuj dziesięciokrotny
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych