JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:56 min. • September 30th, 2026
Należy pobrać zawiesinę zawierającą zróżnicowaną mieszaninę wirusów, wraz z zanieczyszczeniami, takimi jak defektywne cząsteczki wirusowe pozbawione kwasów nukleinowych.
Wirusy te są wstępnie barwione fluorescencyjnym barwnikiem wiążącym kwasy nukleinowe w celu odróżnienia wirusów posiadających genomy od zanieczyszczeń.
Przepuść zawiesinę przez sorter komórek aktywowany fluorescencją, w którym każda cząsteczka jest analizowana pod kątem rozproszenia światła i intensywności fluorescencji.
Sygnał rozproszenia światła odzwierciedla rozmiar cząsteczek, natomiast intensywność fluorescencji wskazuje na zawartość kwasów nukleinowych.
Wyklucz zanieczyszczenia nie wykazujące fluorescencji oraz agregaty wykazujące nienaturalnie wysoką fluorescencję.
Wybierz pojedyncze cząsteczki wirusa zawierające genom i sortuj je bezpośrednio na szkiełko z komorkami pokrytymi agarozą w celu immobilizacji.
Przykryj każdą studzienkę dodatkową warstwą agarozy, aby zatopić wirusy.
Są one teraz gotowe do amplifikacji i analizy genomu pojedynczego wirusa.
W celu sortowania wirusów przy użyciu cytometru przepływowego wyposażonego w specjalistyczne fotopowielacze rozproszenia światła przedniego (FSC-PMT), należy rozpocząć
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych