JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:37 min. • September 30th, 2026
Rozpocznij od nadsączu z hodowli komórek ssaków zawierającego wirusa zapalenia wątroby C.
Wykonaj rozcieńczenia seryjne zawiesiny wirusowej w pożywce wzrostowej.
Zaszczep każdy rozcieńczalnik na monowarstwę komórek hepatomy i inkubuj.
Wirus wnika do komórek, uwalnia swój genom i wykazuje ekspresję białek wirusowych, w tym niestrukturalnego białka replikacyjnego.
Powoduje to powstawanie nowych cząsteczek wirusa, które wypączkowują i infekują sąsiednie komórki, tworząc ogniska zainfekowanych komórek.
Po inkubacji usunąć medium i dodać utrwalacz. Inkubować w niskiej temperaturze w celu utrwalenia komórek i permeabilizacji błony.
Przemyj i dodaj bufor blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Dodaj przeciwciała pierwotne wiążące się z niestrukturalnym białkiem replikacyjnym.
Przemyj, aby usunąć niezwiązane przeciwciała.
Następnie dodaj koniugowane z fluoroforem przeciwciała wtórne, które wiążą się z przeciwciałami pierwotnymi.
Ponownie przemyj, aby usunąć niezwiązane przeciwciała. Dodaj barwnik wiążący DNA w celu zabarwienia jąder komórkowych.
Obserwuj pod mikroskopem fluorescencyjnym i policz fluorescencyjne ogniska, aby określić stężenie wirusa w supernatancie.
Wysiej naiwne
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych