JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:29 min. • September 30th, 2026
Należy rozpocząć od szkiełek podstawowych z komórkami ssaków poddanymi wstępnej inkubacji z analogiem urydyny, z których jedna grupa została zainfekowana wirusem, a druga nie.
W komórkach zainfekowanych wirusem białka wirusowe wiążą się z aparatem transkrypcyjnym gospodarza i hamują produkcję RNA gospodarza, podczas gdy w komórkach niezinfekowanych synteza RNA przebiega niezakłócona.
Przemyć buforem. Dodać paraformaldehyd w celu utrwalenia komórek, a następnie przemyć. Dodać detergent w celu permeabilizacji błon komórkowych, a następnie przemyć.
Przenieś szkiełka nakrywkowe do komory wilgotnościowej.
Dodaj roztwór do barwienia typu click zawierający fluorescencyjny azyd, katalizator i środek redukujący, a następnie inkubuj w ciemności.
Środek redukujący aktywuje katalizator, który umożliwia przyłączenie fluorescencyjnego azotku do nowo syntetyzowanego RNA znakowanego urydyną.
Opłucz szkiełka podstawowe w buforze, zanurz je w wodzie, a następnie usuń nadmiar wilgoci.
Używając medium montażowego zapobiegającego blaknięciu, zamocuj szkiełka nakrywkowe na szkiełku przedmiotowym i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym z odwróconym obiektywem zmniejszona intensyw
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych