JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:31 min. • September 30th, 2026
Zacznij od płytki wielodołkowej zawierającej komórki nabłonkowe zainfekowane genetycznie zmodyfikowanym wirusem.
Wirus niesie transgen kodujący enzym lucyferazę.
Przygotować świeże hodowle komórek nabłonkowych w białej wielodobowej płytce wielodołkowej.
Przenieś nadsącz zawierający nieznane stężenia wirusa do dołków w białych płytkach.
Jednocześnie dodaj znane stężenia wirusa jako standardy.
Odwiruj płytkę, aby wspomóc bliski kontakt między cząsteczkami wirusa a receptorami powierzchniowymi komórek gospodarza, a następnie inkubuj.
Wirus wnika do komórki gospodarza i dostarcza swój genom RNA nici ujemnej.
Wirusowa polimeraza RNA transkrybuje następnie genom do mRNA.
Wykorzystując aparat komórkowy gospodarza, mRNA jest tłumaczone na białka wirusowe, w tym na lucyferazę.
Ilość lucyferazy nagromadzonej wewnątrz komórki gospodarza wzrasta wraz ze wzrostem stężenia wirusa.
Próbki są gotowe do dalszego oznaczania stężeń wirusa za pomocą testu lucyferazowego.
Przygotować krzywą wzorcową VSV-Delta-51 w bezsurowiczym DMEM w taki sposób, aby końcowe stężenie jednostek tworzących płytki na mililitr po przeniesieniu na komórki Vero było następujące. Przygotować 50 µl każdego stężenia na płytkę z komórkami
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych