JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:41 min. • September 30th, 2026
Należy pobrać probówkę zawierającą kulturę startową zmodyfikowanych komórek E. coli, posiadających gen polimerazy T7 regulowany operatorem lac oraz plazmid ekspresyjny.
Plazmid przenosi gen kodujący białko otoczki pochodzące z bakteriofaga Qβ.
Gen ten jest regulowany przez promotor T7 i operator lac.
Przenieś kulturę do kolby zawierającej pożywkę.
Inkubować z wytrząsaniem, aby wspomóc wzrost bakterii.
Dodaj syntetyczny analog allolaktozy, który dezaktywuje represor lac, inicjując ekspresję polimerazy T7.
Polimeraza T7 wiąże się następnie z promotorem T7 na plazmidzie i przeprowadzany jest proces transkrypcji genu białka otoczki, który jest tłumaczony w celu produkcji białka otoczki.
Białka te samoorganizują się w cząsteczki przypominające wirusy (VLP), które tworzą niezakaźne rusztowania.
Przenieś kulturę do butelek do wirowania.
Odwiruj próbkę, aby uzyskać osad komórkowy.
Odlej nadosad i przenieś osad do probówki.
Osad komórkowy, zawierający wewnątrzkomórkowe VLP, jest gotowy do oczyszczania.
Przed rozpoczęciem procedury ekspresji bakteriofaga Q-Beta należy przetrzeć blat roboczy roztworem wybielacza i etanolu w proporcji 1:1. W warunkach aseptycznych przygotować dwie kultury startowe o objęt
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych