JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:51 min. • September 30th, 2026
Zacznij od cząsteczek przypominających wirusy (VLP), zawierających wiązania dwusiarczkowe wyeksponowane na powierzchni kapsydu.
Dodaj środek redukujący w celu rozbicia wiązań disiarczkowych, co spowoduje utworzenie wolnych grup tiolowych przy jednoczesnym zachowaniu struktury kapsydu.
Połącz zredukowane VLP z polietylenoglikolem reaktywnym wobec grup tiolowych, czyli łącznikiem PEG, aby zapobiec ponownemu utlenieniu grup tiolowych.
Łącznik PEG ponownie łączy każdą parę grup tiolowych poprzez tworzenie dwóch wiązań kowalencyjnych.
Ta kowalencyjna koniugacja tworzy również strukturę fluorescencyjną, która w świetle UV wykazuje jasny żółty kolor.
Mieszaninę należy rotować przez dłuższy czas, aby umożliwić pełną konjugację.
Za pomocą filtracji odśrodkowej oczyść PEGylowane VLP, usuwając nieprzereagowane małe cząsteczki przy jednoczesnym zachowaniu nienaruszonych koniugatów.
Przeprowadź nieodredukowany SDS-PAGE, aby wykryć przyłączenie PEG, co zostanie zasygnalizowane fluorescencyjnym prążkiem białka otoczki.
Oceń integralność strukturalną za pomocą natywnej elektroforezy w żelu agarozowym; podobne prążki dla VLP poddanych pegylacji i niepegylowanych potwierdzają obecność nienaruszonych VLP.
Nin
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych