JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:06 min. • September 30th, 2026
Zacznij od adhezyjnej monowarstwy komórek podatnych na zakażenie wirusem.
Wypłucz komórki, a następnie dodaj czynnik dysocjujący, aby je odkleić.
Odwiruj i odlej nadsącz. Przemyj komórki, aby usunąć pozostałości pożywki.
Resuspenduj komórki w soli fizjologicznej z buforem, a następnie przenieś komórki do kuwety.
Wprowadź RNA przepisane z pełnowymiarowego klonu cDNA wirusa zapalenia mózgu japońskiego (JEV) przenoszonego w bakteryjnym sztucznym chromosomie.
Zastosuj impulsy elektryczne, aby przejściowo zwiększyć przepuszczalność błony komórkowej, umożliwiając wnikanie RNA.
Pozostawić komórki do regeneracji, a następnie przenieść je do pożywki hodowlanej.
Wprowadzone RNA naśladuje natywne RNA wirusa w celu produkcji nowych wirionów.
Wykonaj seryjne rozcieńczenie komórek i nanieś je na świeże monowarstwy komórkowe.
Inkubować, aby umożliwić wirionom zainfekowanie sąsiednich komórek.
Przykryć podłożem agarowym i inkubować. Podłoże tworzy półstałą warstwę, która ogranicza rozprzestrzenianie się wirusa do sąsiednich komórek.
Zainfekowane komórki ulegają lizie i tworzą wyraźne plaki, co potwierdza pomyślną rekonstytucję zakaźnego JEV.
Rozpocznij od komórek BHK-21 hodowanych przez 24 godziny w szalkach
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych