JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:36 min. • September 30th, 2026
Należy rozpocząć od rekombinantnie wyrażonego, wolnego od RNA kompleksu nukleoproteiny i fosfoproteiny specyficznego dla danego wirusa.
Inkubuj kompleks z wirusowo-specyficznymi oligonukleotydami RNA, aby zainicjować montaż cząstek przypominających nukleokapsyd.
Podczas procesu składania wirusowe RNA wypiera fragment fosfoproteiny, co pozwala nukleoproteinie na otoczenie RNA, prowadząc do powstania cząsteczek przypominających nukleokapsydy.
Odwiruj próbkę, aby usunąć ewentualny osad.
Należy pobrać uprzednio równoważoną kolumnę do chromatografii wykluczania cząsteczkowego wypełnioną porowatą żywicą, a następnie nałożyć na nią nadsącz.
W miarę przepływu próbki przez kolumnę, duże kompleksy nukleokapsydów są wykluczane z porów i eluują jako pierwsze.
Średniej wielkości kompleksy białkowe i małe cząsteczki RNA wnikają do porów i eluują później.
Monitoruj absorbancję eluatu, aby uzyskać profil elucji z wyraźnymi pikami.
Pierwszy pik reprezentuje zmontowane nukleokapsydy, a za nimi następują mniejsze kompleksy białkowe oraz wolne RNA.
Zabierz frakcję odpowiadającą piku nukleokapsydu w celu walidacji i dalszej analizy.
W celu montażu swoistych dla wirusa nukleokapsydów, wymieszaj i inkubuj oczyszcz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych