JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:37 min. • September 30th, 2026
Należy rozpocząć od płytki wieloodworowej zawierającej komórki nabłonkowe zainfekowane wirusem Zika, który jest wirusem RNA jednoniciowym.
Podczas infekcji wirus uwalnia RNA, który tworzy dwuniciowy RNA lub intermediat dsRNA.
Aby wykryć te produkty pośrednie dsRNA, należy zastąpić medium metanolem w celu permeabilizacji komórek i zachowania ich integralności strukturalnej.
Usunąć metanol i przemyć buforem.
Dodaj roztwór blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Dodaj przeciwciało pierwotne specyficzne dla wirusowego dsRNA.
Inkubować przy delikatnym kołysaniu w niskiej temperaturze, aby umożliwić związanie przeciwciała pierwszorzędowego z wirusowym dsRNA.
Przepłukać buforem, dodać przeciwciało wtórne sprzężone z czerwonym fluoroforem i inkubować.
Przeciwciała wtórne wiążą się z przeciwciałami pierwotnymi.
Przemyj buforem, a następnie dodaj fluorescencyjny barwnik wiążący DNA w celu zabarwienia jądra komórkowego.
Obserwować pod mikroskopem fluorescencyjnym w celu wizualizacji znakowanego pośredniego dsRNA wirusa wewnątrz zainfekowanej komórki.
W celu przeprowadzenia immunocytochemii należy usunąć medium z dołków płytki 12-dołkowej i dodać jeden mililitr metanolu do każdego
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych