JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:33 min. • September 30th, 2026
Należy wziąć płytkę wielodołkową zawierającą monowarstwy komórek nabłonkowych i dodać do dołków zawiesinę wirusową.
Inkubować, sporadycznie kołysząc naczyniem, aby równomiernie rozprowadzić wirusy. Wirusy przywierają do komórek i wnikają do ich wnętrza.
Do jednego dołka należy dodać stopioną agarozę, która po zastygnięciu utworzy półstałą warstwę nakładki.
W innym dołku dodaj lepką warstwę płynną na bazie celulozy mikrokrystalicznej i inkubuj. Jej lepkość ogranicza dyfuzję wirusa, podobnie jak w przypadku warstwy półstałej.
Wewnątrz komórki wirus uwalnia swój genom i produkuje nowe wirusowe RNA oraz białka.
Nowe wirusy montują się, opuszczają komórki i powodują lizę komórkową.
Uwolnione wirusy infekują sąsiednie komórki, tworząc plaki.
Odssać warstwę płynną i dodać utrwalacz, aby zachować niezlizowane komórki.
Wylać utrwalacz i usunąć warstwę agarozy.
Należy dodać barwnik, który barwi żywe komórki, pozostawiając plaki niezafarbowane. Następnie należy wypłukać nadmiar barwnika.
Warstwa płynna pozwala na uzyskanie liczby plak porównywalnej z warstwą półpłynną, co potwierdza możliwość jej stosowania jako alternatywy w testach plackowych.
Dzień po wysianiu komórek, należy użyć mikroskopu odwrócon
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych