JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:53 min. • April 30th, 2023
Najpierw, aby przygotować granulkę, wstrzyknij silikonowy klej medyczny na jeden koniec wstępnie przyciętego kawałka silikonowej rurki. Następnie, zapakuj dihydrotestosteron lub krystaliczny proszek DHT szczelnie wewnątrz rurki. Następnie użyj silikonu z klejem medycznym, aby uszczelnić drugi koniec rurki. Granulki powinny mieć równe ilości silikonu na każdym końcu, bez pęcherzyków. Umieść granulki w roztworze soli fizjologicznej przed włożeniem ich do samicy myszy.
Na znieczulonej myszy użyj bawełnianego wacika ze środkiem dezynfekującym, aby wyczyścić ogoloną powierzchnię operacyjną. Wykonaj małe nacięcie przez skórę w pobliżu szyi. Użyj trocharu, aby zrobić tunel pod skórą w kierunku nosa myszy. Włóż granulat do tunelu. Na koniec uszczelnij nacięcie klejem chirurgicznym. Granulka będzie uwalniać stałą dawkę DHT i jest wymieniana co 4 tygodnie, aby zapewnić długotrwałe narażenie na lek.
Do przygotowania granulatu dihydrotestosteronu lub DHT, użyj żyletki, aby przeciąć 15-milimetrowy kawałek silikonowej rurki i użyj 3-mililitrowej strzykawki wyposażonej w igłę o rozmiarze 20, aby wstrzyknąć od 2 do 5 milimetrów kleju medycznego silikonu na jeden koniec tuby. Pozostaw rurkę do wyschnięcia na noc i sprawdź, czy na uszczelnionym końcu nie ma pęcherzyków powietrza.
Nosząc odpowiednie środki ochrony osobistej, wsyp proszek DHT do plastikowej łódki wagowej w kapturze przepływowym. Wciśnij otwarty koniec tubki z klejem w proszek. Używając dużego, wyprostowanego spinacza do papieru, ubij proszek w dół do rurki, aż DHT osiągnie odpowiednią głębokość eksperymentalną. Następnie uszczelnij otwartą stronę rurki silikonem na noc.
Następnego ranka odetnij każdą uszczelnioną stronę, aby uzyskać 2-milimetrową długość silikonu po obu stronach DHT i bez granulek kontrolnych DHT. Następnie przechowuj granulki w 50-mililitrowej stożkowej tubie owiniętej folią w temperaturze pokojowej przez okres do 3 miesięcy.
W przypadku generowania modelu myszy PCOS, zrównoważ do 20 DHT lub kontroluj granulki w oddzielnych 50-mililitrowych stożkowych probówkach zawierających 30 mililitrów 0,9% soli fizjologicznej przez 24 godziny w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnego dnia potwierdź brak reakcji na uszczypnięcie palca u znieczulonej 2-miesięcznej samicy myszy i użyj sterylnej gazy do podania sekwencyjnego peelingu z jodonem i 70% etanolem na obszar operacyjny.
Następnie wykonaj 5-milimetrowe nacięcie przez skórę w pobliżu szyi i użyj trocharu o rozmiarze 10, aby wykonać 15-milimetrowy tunel w kierunku rostralnym. Za pomocą trocharu wprowadzić granulkę grzbietowo do tunelu i uszczelnić nacięcie klejem chirurgicznym. Ręcznie przybliż krawędzie rany za pomocą kleszczy i delikatnymi pociągnięciami pędzla nałóż 3 cienkie warstwy płynnego kleju na 1 centymetr z każdej strony przystosowanych krawędzi rany.
Następnie umieść mysz samą w klatce na poduszce grzewczej z monitorowaniem aż do pełnego leżenia, wymieniając granulkę co 4 tygodnie, aby utrzymać stały poziom ekspozycji na androgeny.