JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 5:51 min. • April 30th, 2023
Najpierw nałóż żel do echokardiografii na przetwornik ultrasonograficzny i na ogoloną klatkę piersiową znieczulonej myszy przymocowanej do płytki grzewczej. Umieść przetwornik po lewej stronie mostka, skierowany w prawą stronę szyi, aby uzyskać widok przez serce, zwany widokiem przymostkowym o długiej osi.
Obróć przetwornik o 90 stopni zgodnie z ruchem wskazówek zegara, aby uzyskać przymostkowy view w krótkiej osi. Korzystając z tego widoku, nagrywaj obrazy w trybie M, aby uchwycić ruch serca w czasie podczas jego bicia. Aby zmierzyć wymiary lewej komory, zidentyfikuj cztery charakterystyczne interfejsy tkanka-płyn na zarejestrowanych obrazach.
Są to interfejs między jamą prawej komory a przednią ścianą lewej komory; między tą ścianą a lewą jamą komorową; między tą jamą a tylną ścianą lewej komory oraz między tą ścianą a osierdziem.
Następnie oblicz odległości między tymi czterema interfejsami. Powtórz te same pomiary, gdy serce jest rozkurczone lub jest rozluźnione oraz gdy jest w skurczu lub jest skurczone.
Na początek, lekko trzymając mysz za ogon, użyj standardowej wagi laboratoryjnej, aby określić masę ciała zwierzęcia. Po znieczuleniu myszy zgodnie z protokołem tekstowym należy lekko ścisnąć tylną stopę i obserwować, czy noga się chowa. Użyj komercyjnej golarki dla gryzoni, aby ogolić lewą stronę klatki piersiowej i lewą pachę.
Ułóż zwierzę na ciepłej podkładce ustawionej na 40 do 42 stopni Celsjusza w płytkiej pozycji lewostronnej, z głową na godzinie 12 i ogonem na godzinie 6. Następnie użyj taśmy, aby przymocować lewą rękę, lewą nogę i ogon. Nałóż wstępnie podgrzany żel do echokardiografii na ogoloną klatkę piersiową i głowicę głowicy.
Następnie umieść przetwornik echokardiografu przymostkowy w lewo, kierując go na prawą stronę szyi, aby uzyskać dwuwymiarowy widok długiej osi przymostkowej na poziomie mięśnia brodawkowatego. Następnie obróć przetwornik o 90 stopni zgodnie z ruchem wskazówek zegara, aby uzyskać widok z krótkiej osi. Ustal minimalne ustawienie głębi i powiększenie, aby zmaksymalizować jakość obrazu i liczbę klatek na sekundę. Ustaw prędkość zamiatania na maksimum. Nagrywaj obrazy w trybie M z przewodnikiem 2D w widoku krótkiej osi. Nagraj co najmniej 3 serie po 3 pętle cine z biciem serca dla każdego zwierzęcia.
Po uzyskaniu udanych nagrań usuń taśmę z kończyn i ogona. Zetrzyj żel do echokardiografii z klatki piersiowej myszy, poduszki grzewczej i przetwornika. Pozostaw mysz pod obserwacją na poduszce grzewczej, przykrytą chusteczką, aby uniknąć niepotrzebnej ekspozycji na światło i utraty ciepła, dopóki się nie obudzi. Następnie umieść zwierzę z powrotem w klatce.
Analizuj zarejestrowane obrazy w trybie M z widoku krótkiej osi, aby określić wymiary i funkcję lewej komory lub lewej komory. Korzystając z identyfikacji granicy tkanka-krew na przechowywanych obrazach, zmierz grubość przedniej ściany lewej komory w skurczu i rozkurczu, wewnętrzną średnicę skurczową i końcoworozkurczową lewej komory oraz grubość tylnej ściany lewej komory w skurczu i rozkurczu. Zmierzyć wymiary rozkurczowe w czasie pozornych maksymalnych wymiarów rozkurczowych lewej komory i wymiary skurczowe lewej komory na końcu najbardziej wysuniętego do przodu ruchu skurczowego tylnej ściany lewej wysokości. Stuknij ekran dotykowy w ikonę "Analizuj", a następnie w ikonę "LVAWd". Umieścić suwmiarkę elektroniczną na styku prawej jamy komorowej z przednią ścianą lewej komory w rozkurczu.
Następnie umieść suwmiarkę elektroniczną na granicy faz między przednią ścianą lewej komory a jamą lewej komory, aby uzyskać rozkurczową przednią ścianę lewej komory. Umieść suwmiarkę na granicy faz między wnęką lewej komory a tylną ścianą lewej komory, aby uzyskać średnicę wewnętrzną i rozkurczową lewej komory. Umieść suwmiarkę na granicy między tylną ścianą lewej komory a osierdziem, aby uzyskać rozkurczową tylną ścianę lewej komory.
W przypadku wymiarów skurczowych lewej komory należy dotknąć ekranu dotykowego ikony "LVAWs" i ustawić suwmiarkę elektroniczną na styku między prawą jamą komorową a przednią ścianą lewej komory w skurczu. Ustawić suwmiarkę elektroniczną na granicy faz między przednią ścianą lewej komory a jamą lewej komory, aby uzyskać skurczową przednią ścianę lewej komory. Umieść suwmiarkę na granicy faz między wnęką lewej komory a tylną ścianą lewej komory, aby uzyskać średnicę wewnętrzną i skurczową lewej komory. Umieść suwmiarkę na granicy między tylną ścianą lewej komory a osierdziem, aby uzyskać grubość skurczowej tylnej ściany lewej komory.