JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:20 min. • April 30th, 2023
Jama otrzewnej to przestrzeń między ścianą brzucha a wyściółką narządów wewnętrznych. W przypadku wstrzyknięcia dootrzewnowego należy rozpocząć od przytrzymania żywej myszy za obszar szyi w taki sposób, aby głowa myszy przechyliła się w dół, a jej brzuszny brzuch był odsłonięty.
Krępowanie myszy ogranicza jej ruch i przesuwa narządy jamy brzusznej w kierunku przepony, zapobiegając przypadkowemu uszkodzeniu narządów podczas wprowadzania igły.
W pobliżu linii środkowej w poprzek brzucha myszy, w prawym dolnym kwadrancie zlokalizuj punkt do wkłucia igły. To miejsce zapobiega ryzyku przebicia kątnicy.
Następnie należy pobrać strzykawkę zawierającą jednokomórkową zawiesinę komórek raka jajnika. Wbić igłę w wybranym miejscu na głębokość około pół centymetra, aby przeniknąć tylko do zewnętrznej ściany brzucha. Na koniec powoli wstrzyknąć zawiesinę komórek rakowych. Zapewnia to efektywną dystrybucję komórek w obrębie jamy otrzewnej.
Przywróć mysz do klatki i monitoruj ją pod kątem wzrostu guza. Tkanki w jamie otrzewnej mogą uwalniać specyficzne cząsteczki chemotaktyczne, które przyciągają komórki rakowe, prowadząc do ich migracji i kolonizacji, ostatecznie przyczyniając się do rozwoju guza.
Załaduj 500 mikrolitrów fluorescencyjnie znakowanej zawiesiny jednokomórkowej do strzykawki. Następnie należy umieścić strzykawkę w sterylnej igle o rozmiarze 25 G, aby zmniejszyć ścinanie komórek przed wstrzyknięciem. Przytrzymując mysz drugą ręką, podnieś mysz za kark i przytrzymaj ogon za pomocą dłoni i palca wskazującego. Następnie zamocuj lewą tylną nogę między palcem serdecznym a małym. Aby uniknąć urazu narządów jamy brzusznej, należy dobrze przytrzymać mysz, aby nie mogła się poruszać podczas wstrzyknięcia.
Wyobraź sobie linię w poprzek brzucha i zlokalizuj punkt po prawej stronie zwierzęcia i blisko linii środkowej. Punkt wejścia jest czaszkowy i lekko przyśrodkowy ostatniego sutka. Przygotuj się do wkłucia igły po prawej stronie myszy, aby uniknąć jelita ślepego i zmniejszyć ryzyko przebicia jelit. Wbij igłę w dolną boczną część brzucha myszy na głębokość około 0,5 centymetra. Odciągnąć tłok, aby upewnić się, że igła nie przebiła się przez naczynie krwionośne lub inne narządy otrzewnej.
Jeśli płyn nie jest zasysany, należy wstrzyknąć próbkę pod powolnym, stałym ciśnieniem. Następnie wyjmij igłę i umieść mysz z powrotem w klatce. Nie należy ponownie zamykać strzykawki przed wyrzuceniem jej do pojemnika na ostre przedmioty.