JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:55 min. • April 30th, 2023
Hodowle organoidów 3D komórek nowotworowych podsumowują wiele patofizjologicznych cech nowotworów u ludzi. W ten sposób te kultury in vitro stanowią doskonały model do badań nad rakiem.
Aby przetworzyć te organoidy, zacznij od kultury wstępnie uformowanych organoidów 3D wyhodowanych w odpowiedniej macierzy błony podstawnej. Dodaj żądaną pożywkę do odzyskiwania komórek i inkubuj. Pożywka ułatwia depolimeryzację żelu matrycowego, uwalniając organoidy 3D do roztworu.
Odwirować tę mieszaninę, aby granulować organoidy. Pożywka odzysku zawierająca składniki matrycy pozostaje w supernatancie. Odrzucić supernatant. Następnie dodaj roztwór paraformaldehydu do osadu organoidowego. Substancja chemiczna dostaje się do komórek organoidów i wiąże się z aminokwasami, powodując sieciowanie białek i utrwalanie próbki. Ten etap ma kluczowe znaczenie dla wszelkich dalszych zastosowań histologicznych.
Granulować organoidy w celu oddzielenia i usunięcia supernatantu zawierającego paraformaldehyd. Dodaj ciepłą stopioną agarozę do organoidów. Za pomocą igły odczepić i rozproszyć granulowane organoidy w ciekłej agarozie. Pozwól agarozie zestalić się i osadzić organoidy. Użyj czopa agarozowego zawierająceg
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych