JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:08 min. • April 30th, 2023
Lizat komórkowy, czyli płyn zawierający lizowaną zawartość komórek, znajduje zastosowanie w dalszych procesach, takich jak ekstrakcja i analiza białek. Badanie tych frakcji ujawnia informacje o cechach i funkcjach komórek.
Aby przygotować lizaty białek organoidowych, zacznij od kultury organoidów wyhodowanych w pożądanej macierzy błony podstawnej. Usuń zużytą pożywkę hodowlaną z naczynia. Dodaj ciepłe podłoże zawierające proteazy na matrycę. Pipetować kilkakrotnie, aby usunąć matrycę z naczynia.
Inkubować mieszaninę. Enzymy proteolityczne w pożywkach degradują macierz i uwalniają organoidy do roztworu. Odwirować próbkę, aby oddzielić organoidy od supernatantu zawierającego enzym.
Zawiesić osad organoidowy w odpowiednim buforze do lizy białek. Przeprowadzić inkubację próbki. Detergenty zawarte w buforze rozrywają błony komórkowe organoidów, uwalniając zawartość wewnątrzkomórkową do roztworu. Jednocześnie inhibitory białek w buforze dezaktywują wszelkie uwolnione enzymy proteazy i fosfatazy, zapobiegając degradacji ich białek substratowych.
Następnie należy poddać mieszaninę sonikacji, aby całkowicie rozbić komórki. Otoczka jądrowa pęka i uwalnia białka jądrowe do roztworu. Fale dźwi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych