JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:45 min. • April 30th, 2023
Autofagia to proces wewnątrzkomórkowy, który ułatwia degradację niepożądanych składników cytoplazmatycznych i organelli w wyspecjalizowanych przedziałach trawiennych zwanych lizosomami. Aby ocenić autofagię, zacznij od przylegającej hodowli komórek raka prostaty wykazujących ekspresję autofagicznych białek markerowych zwanych LC3 sprzężonych z zielonymi białkami fluorescencyjnymi.
Z natury komórkom raka prostaty brakuje enzymu syntazy argininobursztynianu niezbędnego do syntezy aminokwasów argininy. Komórki te są zatem zależne od zewnętrznej suplementacji argininy za pomocą pożywek w celu przetrwania i proliferacji.
Następnie potraktuj komórki deiminazą argininy lub ADI. ADI hydrolizuje wolną argininę w pożywce, prowadząc do wyczerpania argininy. W konsekwencji komórki poddawane są stresowi metabolicznemu, inicjując wewnętrznie odpowiedź autofagiczną. Jednocześnie potraktuj komórki czerwonym barwnikiem fluorescencyjnym, który oznacza lizosomy w komórkach.
Podczas autofagii błoniaste struktury w kształcie miseczki zwane fagoforami gromadzą się wokół uszkodzonych składników cytoplazmatycznych. W końcu rozszerzają się i uszczelniają swój ładunek, jednocześnie koniugując się z autofagi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych