JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:43 min. • April 30th, 2023
Technika zatapiania parafiny w formalinie lub FFPE pozwala na zachowanie utrwalonych, odwodnionych i oczyszczonych próbek tkanek w blokach parafinowych w celu długotrwałego przechowywania. FFPE zachowuje białka i inne ważne składniki wewnątrzkomórkowe bez uszczerbku dla morfologii tkanek.
Deparafinizacja, czyli usunięcie wosku parafinowego otaczającego osadzoną tkankę, jest krytycznym krokiem przed przetworzeniem jakiejkolwiek próbki tkanki FFPE do dalszej analizy. Aby rozpocząć deparafinowanie, należy rozpocząć od szkiełka podstawowego zawierającego niezabarwiony wycinek tkanki FFPE o odpowiedniej grubości.
Zanurz wycinek tkanki w kąpieli ksylenowej i inkubuj przez żądany czas. Ksylen, rozpuszczalnik organiczny, rozpuszcza wosk parafinowy, który osiadł i wniknął w tkankę. Całkowite usunięcie wosku parafinowego odsłania utrwaloną i odwodnioną przezroczystą próbkę tkanki.
Po odparafinowaniu potraktować próbkę absolutnym etanolem. Etanol wypiera i usuwa wszelkie ślady ksylenu z wycinka tkanki. Następnie zanurz tkankę w malejących stężeniach etanolu. Proces ten ponownie nawadnia tkankę w celu dalszej analizy histologicznej.
Na koniec pozostaw zjeżdżalnię w spokoju przez żądany czas. Ten krok pozwala na odparowanie etanolu i wody i uzyskanie suchego, uwodnionego skrawka tkanki.
Na początek przygotuj 10 mikrometrów niebarwionych skrawków zatopionych w parafinie utrwalonych w formalinie. Umieść szkiełka w szklanym uchwycie na szkiełko i napełnij je ksylenem, upewniając się, że cała tkanka na szkiełku jest zanurzona. Pozostaw szkiełka w ksylenie na 15 minut. Następnie wylej ksylen, trzymając szkiełka końcówką pipety, aby nie wypadły. Wlej więcej ksylenu do tego samego poziomu co poprzednio i powtórz inkubację.
Wylej ksylen i napełnij uchwyt szkiełka 100% etanolem, upewniając się, że cała tkanka na szkiełku jest całkowicie zanurzona. Pozostaw szkiełka w etanolu na 3 minuty. Następnie zastąp etanol świeżym etanolem i pozwól im inkubować jeszcze przez dwie minuty. Odlej etanol i usuń szkiełka. Ostrożnie połóż je ekranem do góry na czystym ręczniku papierowym i pozostaw do wyschnięcia na 10 minut.