Konwersja wodorosiarczynu genomowego DNA: metoda badania metylacji DNA w próbkach genomowego DNA z tkanki raka przewodu pokarmowego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:36 min. • April 30th, 2023
Metylacja DNA polega na dodawaniu grup metylowych do reszt cytozyny DNA w celu wytworzenia metylo-cytozyny, powodując zmianę DNA i regulację ekspresji genów.
Aby zbadać metylację DNA, zacznij od pobrania surowego ekstraktu DNA z komórek rakowych. Dodać bufor rozcieńczający i inkubować w temperaturze pokojowej. Bufor rozcieńcza mieszaninę i denaturuje dwuniciowe DNA na jednoniciowe DNA, sprzyjając dostępności zasad do kolejnych reakcji.
Dodaj odczynnik konwersyjny i inkubuj w ciemności. Wodorosiarczyn sodu w odczynniku wyzwala sulfonowanie, a następnie deaminację niemetylowanych reszt cytozyny, w wyniku czego powstaje sulfonian uracylu. Jednak metylowane reszty cytozyny pozostają niezmienione.
Następnie uzupełnij DNA buforem wiążącym i przenieś go do wstępnie zmontowanej kolumny filtra spinowego. Bufor pomaga DNA związać się z filtrem.
Odwirować w celu usunięcia mieszaniny buforu i odczynnika wodorosiarczynowego z uwięzionego DNA w kolumnie. Odrzuć przepływ. Dodaj alkaliczny bufor odsulfonacyjny do DNA. Bufor pomaga w usuwaniu grup siarczynowych z sulfonianu uracylu do wytworzenia uracylu.
Odwirować w celu usunięcia zużytego buforu. Teraz dodaj bufor elucyjny do kolumny, aby wymyć p
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych