JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:59 min. • April 30th, 2023
Neutrofile o niskiej gęstości lub LDN to odrębna subpopulacja neutrofili występująca w podwyższonej liczbie podczas stanów patologicznych, takich jak rak przewodu pokarmowego. LDN można izolować z płukanek jamy otrzewnej lub płynu z płukania pacjentów.
Najpierw przefiltruj płyn do płukania, aby usunąć resztki tkanek. Odwirować filtrat w celu uzyskania osadu zawierającego komórki krwi, w tym LDN. Zawiesić go ponownie w odpowiednim buforze. Nałożyć tę zawiesinę na podłoże o odpowiednim gradiencie gęstości, optymalnym do izolacji LDN.
Odwirować w celu oddzielenia różnych składników krwi na podstawie ich względnej gęstości. Gęstsze erytrocyty tworzą dolną warstwę, podczas gdy najmniej gęsta frakcja plazmy tworzy najwyższą warstwę. Mniej gęste LDN zajmują warstwę pośrednią wraz z innymi komórkami jednojądrzastymi.
Przenieść warstwę pośrednią do świeżej probówki zawierającej odczynnik blokujący. Składniki odczynnika blokują niespecyficzne miejsca wiązania na wszystkich powierzchniach komórek niedocelowych i zwiększają swoistość dla LDN podczas późniejszego znakowania.
Dodaj mikrogranulki sprzężone z przeciwciałami skierowane do określonej cząsteczki powierzchniowej komórki z nadekspresją
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych