JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:05 min. • April 30th, 2023
Podczas stanów patologicznych, takich jak rak, aktywowane neutrofile uwalniają zewnątrzkomórkowe pułapki neutrofili lub NET - sieć zewnątrzkomórkowych włókien DNA związanych z histonami i enzymami proteolitycznymi. Struktury te zatrzymują komórki nowotworowe i odgrywają kluczową rolę w przerzutach raka.
Aby zbadać zachowanie po adhezji uwięzionych komórek nowotworowych w NET in vitro, najpierw pohoduj neutrofile o niskiej gęstości - subpopulację neutrofili - w naczyniu hodowlanym pokrytym polimerem, które ułatwia przyłączanie komórek. Inkubuj, aby aktywować neutrofile w celu uwolnienia siatkowych sieci NET.
Następnie dodaj nieprzepuszczalny dla błony zielony fluorescencyjny barwnik jądrowy, aby zabarwić włókna DNA w NET. Usuń zużyte medium. Dodaj zawiesinę komórek rakowych do kultury neutrofili
.Inkubuj kulturę przez krótki czas, aby ułatwić interakcję komórka rakowa-NET. Składnik DNA NET działa jako czynnik chemotaktyczny, który stymuluje migrację komórek rakowych i pomaga w ich adhezji do NET.
Usuń zużyte medium. Delikatnie spłucz kulturę odpowiednią świeżą pożywką, aby usunąć wszelkie niezwiązane komórki rakowe z naczynia hodowlanego. Uzupełnij świeżą pożywką zawierającą serum.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych