Sekcje, barwienie i obrazowanie TEM osadzonych egzosomów: protokół do wizualizacji cech strukturalnych egzosomów za pomocą TEM

Egzosomy to naniszone, kuliste pęcherzyki otoczone dwuwarstwą lipidową zawierającą cząsteczki DNA, RNA i białka obecne wewnątrz światła.

Aby zobrazować strukturę egzosomu za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej lub TEM, zacznij od pobrania bloku egzosomu - stałego bloku matrycy zawierającego osadzone egzosomy. Za pomocą ultramikrotomu uzyskaj ultracienkie odcinki bloku egzosomu.

Zbierz sekcję egzosomu na odpowiedniej siatce i pozwól jej przylegać do powierzchni. Siatka zapewnia stabilne podparcie próbki egzosomu podczas kolejnych etapów barwienia.

Następnie umieść siatkę nad kroplą octanu uranylu - plamy z metalu ciężkiego - i inkubuj przez żądany czas. Jony uranylowe oddziałują z lipidami, białkami, DNA i RNA obecnymi w egzosomach.

Następnie wybarwić sekcję egzosomu cytrynianem ołowiu, który również wiąże się z egzosomalnymi biomolekułami. Cytrynian ołowiu słabo wiąże się z wstępnie związanymi jonami uranylu i zwiększa kontrast z tłem podczas obrazowania.

Obserwuj podwójnie wybarwione egzosomy za pomocą TEM. TEM skupia wiązkę elektronów na próbce egzosomu. Barwione obszary w egzosomie rozpraszają elektrony silniej w porównaniu z obszarami niebarwionymi.

Apertura obiektywu