Sekcje, barwienie i obrazowanie TEM osadzonych egzosomów: protokół do wizualizacji cech strukturalnych egzosomów za pomocą TEM

0 views • 2:32 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Egzosomy to naniszone, kuliste pęcherzyki otoczone dwuwarstwą lipidową zawierającą cząsteczki DNA, RNA i białka obecne wewnątrz światła.

Aby zobrazować strukturę egzosomu za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej lub TEM, zacznij od pobrania bloku egzosomu - stałego bloku matrycy zawierającego osadzone egzosomy. Za pomocą ultramikrotomu uzyskaj ultracienkie odcinki bloku egzosomu.

Zbierz sekcję egzosomu na odpowiedniej siatce i pozwól jej przylegać do powierzchni. Siatka zapewnia stabilne podparcie próbki egzosomu podczas kolejnych etapów barwienia.

Następnie umieść siatkę nad kroplą octanu uranylu - plamy z metalu ciężkiego - i inkubuj przez żądany czas. Jony uranylowe oddziałują z lipidami, białkami, DNA i RNA obecnymi w egzosomach.

Następnie wybarwić sekcję egzosomu cytrynianem ołowiu, który również wiąże się z egzosomalnymi biomolekułami. Cytrynian ołowiu słabo wiąże się z wstępnie związanymi jonami uranylu i zwiększa kontrast z tłem podczas obrazowania.

Obserwuj podwójnie wybarwione egzosomy za pomocą TEM. TEM skupia wiązkę elektronów na próbce egzosomu. Barwione obszary w egzosomie rozpraszają elektrony silniej w porównaniu z obszarami niebarwionymi.

Apertura obiektywu filtruje te silnie rozproszone elektrony. W ten sposób egzosomy zawierające barwione biomolekuły wydają się ciemniejsze niż tło.

Za pomocą ultramikrotomu przygotuj skrawki o grubości 60 nanometrów. Umieść skrawki na siatce niklowej i dwukrotnie zabarwij niektóre z nich 2% octanem uranylu przez 20 minut, a następnie cytrynianem ołowiu przez 10 minut. Następnie umieść wybarwiony fragment w transmisyjnym mikroskopie elektronowym i obejrzyj próbkę przy napięciu 80 kV i postępuj zgodnie z automatycznymi ustawieniami czasu ekspozycji. Mając w zasięgu wzroku obraz egzosomu, uzyskaj i zapisz obraz za pomocą oprogramowania mikroskopu.

09:46

Metoda otrzymywania seryjnych ultracienkich przekrojów mikroorganizmów w transmisyjnej mikroskopii elektronowej

Related Videos

0 Views

08:52

Osadzanie parafiny i cienkie cięcie biofilmów kolonii drobnoustrojów do analizy mikroskopowej

Related Videos

0 Views

05:00

Metoda cięcia i pływania tkanki zatopionej w parafinie do cięcia

Related Videos

0 Views

12:10

Rekonstrukcja kompleksu egzosomu w mikroskopii elektronowej pojedynczych cząstek metodą losowego pochylenia stożkowego

Related Videos

0 Views

03:10

Barwienie ujemne oczyszczonych egzosomów: procedura wizualizacji morfologii egzosomów za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej

Related Videos

0 Views

08:00

Korelacyjna, konfokalna i trójwymiarowa mikroskopia elektronowa określonej komórki czuciowej

Related Videos

0 Views

06:59

Izolacja i profilowanie egzosomów zawierających mikroRNA z ludzkiej żółci

Related Videos

0 Views

11:16

Korelacyjna mikroskopia świetlna i elektronowa z wykorzystaniem nanocząstek kropek kwantowych

Related Videos

0 Views

11:15

Przygotowanie próbek i obrazowanie egzosomów za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej

Related Videos

0 Views

09:21

Obrazowanie mitochondriów i retikulum endoplazmatycznego za pomocą korelacyjnej mikroskopii świetlnej i objętościowej

Related Videos

0 Views

Last updated: 11 July 2026