Barwienie ujemne oczyszczonych egzosomów: procedura wizualizacji morfologii egzosomów za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej

Aby wykonać barwienie ujemne egzosomów - nanosferycznych, kulistych pęcherzyków - zacznij od pobrania odpowiedniej siatki mikroskopii elektronowej. Przygotuj siatkę za pomocą wyładowcy żarowego. Proces ten sprawia, że powierzchnia siatki jest hydrofilowa, co zapewnia lepszą przyczepność próbek.

Jednocześnie weź zawiesinę oczyszczonych egzosomów w probówce. Uzupełnij probówkę paraformaldehydem - utrwalaczem próbki - i inkubuj. Paraformaldehyd przenika do egzosomów i sieciuje białka i kwasy nukleinowe. Ten krok jest niezbędny do zachowania morfologii egzosomów.

Teraz załaduj zawiesinę egzosomu na wcześniej przygotowaną siatkę i inkubuj, aby umożliwić adsorpcję. Następnie dodaj kilka kropli octanu uranylu, plamy z ciężkiego metalu, na siatkę. Jony uranylowe wiążą się z białkami błonowymi i lipidami, tworząc osad wokół granicy egzosomu.

Na koniec umyj kratkę w wodzie, aby usunąć nadmiar plamy. Pozostaw siatkę do wyschnięcia i zobrazuj za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej lub TEM.

Kiedy wiązka elektronów uderza w egzosomy, plama otaczająca próbkę rozprasza więcej elektronów. Egzosomy mają mniejszą gęstość elektronów, przepuszczają wiązkę. Te różnie rozproszone elektrony są w