JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:01 min. • April 30th, 2023
Blaszka właściwa jelitowa, znajdująca się poniżej nabłonka jelitowego, składa się z luźnej tkanki łącznej wraz z gęstą siecią włókien kolagenowych zawierających różnorodny szereg komórek, takich jak fibroblasty, komórki jednojądrzaste, w tym limfocyty i monocyty. Komórki te odgrywają kluczową rolę w utrzymaniu homeostazy.
Aby wyizolować komórki jednojądrzaste, zacznij od pobrania fragmentów okrężnicy myszy. Fragmenty należy traktować buforem wytrawiającym zawierającym enzymy kolagenazy. Enzymy kolagenazy trawią włókna kolagenowe w tkance, uwalniając komórki do zawiesiny.
Zebrać supernatant i przefiltrować go przez sitka komórkowe w celu usunięcia niestrawionej tkanki i zanieczyszczeń oraz uzyskania zawiesiny jednokomórkowej. Dodać schłodzony bufor do filtratu w celu inaktywacji enzymów kolagenazy.
Odwirować, aby oddzielić komórki. Odrzucić supernatant zawierający enzymy i ponownie zawiesić osad komórkowy w pożywce separacyjnej na bazie krzemionki o niskiej gęstości. Następnie nałóż zawiesinę na podłoże separacyjne na bazie krzemionki o dużej gęstości, aby utworzyć gradient separacji.
Odwirować mieszaninę. Komórki jednojądrzaste osadzają się i tworzą białą warstwę na granicy między
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych