Izolacja kolonii komórek rakowych z kurczaka CAM: procedura izolowania komórek rakowych z kultur jaj bez skorupek

Błona kosmówkowo-omocznaniowa kurczaka lub CAM to trójwarstwowa błona znajdująca się tuż pod skorupką jajka. Składa się z ektodermy zewnętrznej, wysoce unaczynionej mezodermy i najbardziej wewnętrznej endodermy.

Mezoderma CAM składa się z naczyń krwionośnych, fibroblastów i składników zrębu, a tym samym zapewnia korzystne środowisko do kolonizacji komórek nowotworowych.

Aby wyizolować skolonizowane komórki rakowe z CAM, zacznij od pobrania bezskorupkowej kultury jajowej z wstępnie wstrzykniętymi fluorescencyjnie znakowanymi komórkami rakowymi w naczyniu. Wizualizuj kulturę jaj pod mikroskopem fluorescencyjnym. Zlokalizuj fluorescencyjne i zwarte kolonie raka z przerzutami.

Delikatnie wyciąć tkankę CAM zawierającą interesujące nas kolonie przerzutowe. Przenieść wyciętą tkankę CAM do probówki do mikrowirówki. Zmiel tkankę na małe kawałki, aby CAM był dostępny do leczenia enzymatycznego w kolejnych krokach.

Uzupełnij probówkę enzymem kolagenazy i inkubuj. Kolagenaza degraduje białko kolagenowe w mezodermie CAM i inicjuje dysocjację kolonii nowotworowych. Odwirować zawiesinę w celu granulacji komórek rakowych, pozostałości tkanki CAM i fibroblastów CAM. Odrzucić supernatant zawierający