JoVE Encyclopedia of Experiments
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:36 min • April 30th, 2023
Podczas ortotopowej inokulacji dośluzówkowej komórki nowotworowe pasujące do histotypu tkanki błony śluzowej są dostarczane do tkanki błony śluzowej biorcy.
Na początek przytrzymaj znieczuloną mysz za szyję na platformie chirurgicznej, aby uzyskać łatwiejszy dostęp do jej ust.
Przygotować zawiesinę wysoce przerzutowych komórek nowotworowych w schłodzonej macierzy błony podstawnej w strzykawce. Niska temperatura zapobiega krzepnięciu zawiesiny.
Ostrożnie wstrzyknąć zawiesinę w wewnętrzną stronę policzka lub policzka myszy. Obszar policzkowy jest wyścielony błoną śluzową policzka, która jest otoczona siecią naczyń krwionośnych i limfatycznych.
Upewnij się, że zawiesina komórek rakowych jest całkowicie dostarczona i delikatnie wycofaj igłę. Pozwól matrycy zestalić się i osadź w niej komórki.
Pozwól myszy na odzyskanie sprawności. W ciągu kilku dni od wstrzyknięcia w miejscu wstrzyknięcia rozwija się guz pierwotny. Ostatecznie komórki tego guza o wysokim potencjale przerzutowym mogą przemieszczać się przez układ limfatyczny i wynaczyniać do węzłów chłonnych.
Te komórki rakowe przystosowują się do nowego mikrośrodowiska oraz namnażają się i tworzą przerzutowe kolonie w węzłach chłonnych.
Bezpośrednio przed wstrzyknięciem należy wymieszać komórki w stosunku zawiesiny komórek nowotworowych 1 do 1 do macierzy błony podstawnej na lodzie. Załaduj jedną strzykawkę o pojemności 0,5 mililitra wyposażoną w igłę 23G ze 100 mikrolitrami komórek na zwierzę biorcy. Umieścić strzykawki na lodzie i potwierdzić brak reakcji na uszczypnięcie palca u znieczulonej myszy.
Następnie włóż igłę do prawej lub lewej okolicy policzkowej przez dostępną otwartą przestrzeń po obu stronach jamy ustnej, trzymając strzykawkę równolegle do okolicy policzkowej, gdy znajduje się ona w jamie ustnej, aby ułatwić wstrzyknięcie pełnej 100-mikrolitrowej objętości zawiesiny macierzy błony podstawnej komórki w ciągu 5 sekund. Trzymać strzykawkę na miejscu przez dodatkowe 5 sekund, aby upewnić się, że cały materiał został wstrzyknięty przed delikatnym wyjęciem strzykawki. Guzy staną się rażąco widoczne za około tydzień.