JoVE Encyclopedia of Experiments
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:24 min • April 30th, 2023
Błona kosmówkowo-omoczniowa lub CAM jest błoną pozazarodkową, ściśle przylegającą do wewnętrznej błony skorupy nienaruszonego jaja. CAM jest idealnym systemem do implantacji i modelowania guza, ponieważ jest to błona z naturalnym niedoborem odporności i silnie unaczyniona.
Aby zebrać CAM zawierającą nowotwór, najpierw weź żywotne zapłodnione jajo kurze z w pełni rozwiniętym CAM wcześniej przesadzonym z guzem. Dodaj paraformaldehyd do CAM. Paraformaldehyd sieciuje białka błonowe, dzięki czemu błona staje się sztywniejsza, co ułatwia jej zbieranie.
Następnie przeciąć wokół jaja, aby oddzielić górną część skorupki jajka od pozostałej części jaja, przy czym CAM z guzem nadal jest przymocowany do usuniętej skorupy. Przytrzymaj i podnieś CAM za jedną krawędź, aby płynnie odłączyć go od skorupki jajka.
Następnie umieść zebrany CAM w paraformaldehydzie z przeszczepem guza skierowanym do góry. Paraformaldehyd zachowuje morfologię CAM i przeszczepu guza, przygotowując w ten sposób pobraną błonę do różnych dalszych analiz.
Pod koniec inkubacji umieść jaja na blacie laboratoryjnym. Za pomocą strzykawki przebić błonę jajową każdego jajka i nałożyć około 300 mikrolitrów 4% paraformaldehydu na każdą błonę kosmówkowo-omocznikową, aby lekko usztywnić tkankę i ułatwić proces zbioru.
Za pomocą nożyczek usuń górną połowę skorupki jajka z przyczepioną błoną kosmówkowo-omocznikową. Zmniejsz rozmiar skorupy do około 3 centymetrów średnicy, zachowując część błony kosmówkowo-omoczniowej, w której przeszczepiono zwój korzenia grzbietowego i komórki nowotworowe w środku fragmentu skorupy. Następnie chwyć błonę kosmówkowo-omocznikową cienkimi kleszkami i oderwij tkankę od skorupki jajka w celu przeniesienia do jednego dołka 6-dołkowej płytki zawierającej 2 mililitry 4% paraformaldehydu na studzienkę.