Przygotowanie zawiesiny ECM: technika uzyskiwania jednorodnej zawiesiny z tkankowej macierzy zewnątrzkomórkowej

Macierz zewnątrzkomórkowa lub ECM, złożona sieć nośna w tkankach, składa się z proteoglikanów i białek.

Aby uzyskać homogenizowany ECM, zacznij od pobrania odmierzonej ilości decelularizowanego proszku ECM do probówki. Teraz dodaj zakwaszony bufor do probówki, aby utworzyć zawiesinę ECM.

Jednocześnie w innej probówce rozpuść alfa-amylazę - enzym glikolityczny - w tym samym zakwaszonym buforze. Kwaśne pH tego buforu ułatwia optymalną aktywność enzymu alfa-amylazy.

Następnie uzupełnić probówkę zawierającą zawiesinę ECM roztworem enzymu alfa-amylazy. Inkubować probówkę z ciągłym mieszaniem. Alfa-amylaza hydrolizuje glikany - ugrupowania węglowodanowe - obecne w proteoglikanach.

Odwirować w celu osadzenia bogatej w białko frakcji ECM, pozostawiając strawione glikany i zużyte enzymy w supernatancie. Odrzucić supernatant.

Zawiesić osad w roztworze chlorku sodu. Jony chlorkowe ekstrahują białka z osadu ECM do zawiesiny. Odwirować i odrzucić sklarowany sklarat zawierający chlorek sodu.

Następnie dodaj kwas octowy do osadu ECM zawierającego białko. Kwas octowy dodatkowo rozpuszcza agregaty białkowe ECM i wprowadza je w zawiesinę.

Użyć homogenizatora, aby uzyskać jednolitą zawiesinę ECM. Prz