Test metylotiotiazolylotetrazolium lub MTT: test kolorymetryczny do pomiaru oporności na leki poprzez określenie aktywności metabolicznej w komórkach rakowych

Test tetrazolowy metylotiazolu lub MTT umożliwia ocenę żywotności komórek na podstawie pomiaru komórkowej aktywności metabolicznej.

Aby rozpocząć test, należy przygotować szereg rosnących stężeń interesującego Cię leku. Dodaj równe objętości różnych stężeń leku do studzienek płytki wielodołkowej.

Następnie należy odpipetować zawiesinę pożądanych wrażliwych na leki rodzicielskich komórek rakowych i ich lekoopornych wariantów w odpowiednim podłożu, każdy do zestawu studzienek zawierających różne stężenia leku. Inkubuj płytkę.

W hodowli wrażliwe na leki komórki nowotworowe są wrażliwe na cząsteczki leku, co prowadzi do śmierci komórki nawet przy niskich stężeniach. Wręcz przeciwnie, lekooporne komórki nowotworowe są niewrażliwe na cząsteczki leku, co ułatwia ich przetrwanie i namnażanie się nawet przy wyższych stężeniach leku.

Potraktuj komórki roztworem MTT i inkubuj. MTT, dodatnio naładowana sól tetrazolowa, łatwo przenika do metabolicznie aktywnych komórek. W tych komórkach enzymy oksydoreduktazy zależne od NAD(P)H redukują sól MTT do nierozpuszczalnych w wodzie kryształów formazanu, które są transportowane na powierzchnię komórki.

Teraz dodaj odpowiedni roztwór do rozpuszczania do