JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:32 min. • April 30th, 2023
W przypadku raka urotelialnego pochodzącego od pacjenta lub generacji mysiego modelu UCC, mysz z obniżoną odpornością jest inokulowana ludzkimi komórkami UCC w celu zbadania progresji raka i przerzutów.
Aby rozpocząć ksenografię, weź znieczuloną samicę myszy z obniżoną odpornością. Ogol dolną część pleców myszy, aby odsłonić jej obszar miednicy. Teraz umieść mysz w pozycji leżącej na plecach z odsłoniętą skórą w kontakcie z podkładką dyspersyjną, która służy jako elektroda uziemiająca, aby zakończyć obwód podczas stymulacji elektrycznej.
Następnie weź angiocewnik, cienką pustą rurkę, przymocowaną do prowadnika. Nasmaruj powierzchnię cewnika i włóż go do cewki moczowej myszy, aby uzyskać dostęp do pęcherza. Umieść aktywną elektrodę na prowadniku, aby stymulować ścianę pęcherza. Procedura ta pomaga rozerwać warstwę mukopolisacharydową, barierę ochronną błony śluzowej pęcherza moczowego, a także pomaga w późniejszym wszczepieniu komórek nowotworowych.
Teraz delikatnie wyjmij zespół angiocewnik-prowadnik z cewki moczowej. Weź drugi angiocewnik podłączony do strzykawki zawierającej zawiesinę komórek UCC i wprowadź go do cewki moczowej myszy. Wstrzyknąć komórki UCC do pęcherza moczowego myszy. Komórki rakowe wchodzą w interakcję z błoną śluzową pęcherza moczowego, tworząc guz, który może ostatecznie rozprzestrzenić się na inne tkanki i narządy.
Aby przygotować zwierzę do wstrzyknięcia komórek UCC, użyj kremu do depilacji, aby ogolić dolną część pleców 6- do 8-tygodniowej samicy myszy NOD/SCID. Aby wprowadzić komórki UCC do pęcherza moczowego, najpierw należy ustawić monopolarną maszynę do elektrokoagulacji o mocy 4 watów. Po znieczuleniu myszy ułóż ją w pozycji leżącej z pyskiem w stożku nosowym z izofluranem i gołymi plecami mocno uziemionymi na elektrodzie dyspersyjnej.
Nasmaruj angiocewnik o rozmiarze 24 galaretką smarującą, a następnie delikatnie, ale stanowczo wprowadź angiocewnik przez cewkę moczową myszy. Jeśli cewnik wygina się przy wejściu, włóż przewód doprowadzający do połowy do cewnika, aby zapewnić stabilność. Następnie całkowicie włóż prosty prowadnik o stałym rdzeniu o średnicy 0,64 milimetra 1 milimetr za końcem angiocewnika.
Przytrzymaj kołek monopolarny do prowadnika przez 1 sekundę, co pozwoli na elektryczne podrażnienie błony śluzowej pęcherza. Podłącz świeży sterylny angiocewnik do 1-mililitrowej strzykawki Luer-Lok i pobierz do 200 mikrolitrów komórek UCC. Usuń prowadnik i angiocewnik z cewki moczowej, a następnie włóż angiocewnik z przymocowaną do niego strzykawką z komórkami.
Wstrzyknij 50 mikrolitrów komórek do pęcherza myszy i aby komórki przylegały do ściany pęcherza, odczekaj kilka sekund przed usunięciem angiocewnika. Na koniec wyjmij mysz ze stożka nosowego izofluranu i podkładki uziemiającej i obserwuj ją przez 1 godzinę zgodnie z procedurą pod kątem oznak niepokoju.