Barwienie zewnątrzkomórkowego DNA: metoda identyfikacji zewnątrzkomórkowego DNA w skrawkach tkanki FFPE

Umierająca komórka uwalnia na zewnątrz komórkę fragment DNA zwany DNA zewnątrzkomórkowym. Aby wybarwić zewnątrzkomórkowe DNA, zacznij od pobrania utrwalonego w formalinie wycinka tkanki zatopionej w parafinie lub FFPE na szklanym szkiełku. Podgrzej szkiełko przez żądany czas. Ułatwia to przyleganie tkanki do powierzchni szkiełka i zmiękcza otaczającą parafinę.

Zanurz szkiełko w płynie deparafinowającym, aby całkowicie rozpuścić warstwę parafiny wokół tkanki. Następnie zanurz szkiełko w malejących stężeniach etanolu, aby ponownie nawodnić odparafinowaną tkankę. Po ponownym nawodnieniu zanurz szkiełko we wrzącym roztworze do pobierania antygenu. Zabieg ten demaskuje epitopy, które uległy zmianie podczas procesu utrwalania.

Nałóż na szkiełko przeciwciała pierwszorzędowe i pozwól im związać się ze specyficznymi, niezamaskowanymi epitopami obecnymi na komórce. Następnie dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała drugorzędowe, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Zanurz szkiełko w roztworze Sudan Black, aby zmniejszyć autofluorescencję tła.

Na koniec umieść kroplę podłoża montażowego uzupełnionego DAPI na wycinku tkanki i uszczelnij ją szkiełkiem nakrywkowym. Inkubuj, a