Pozyskiwanie ludzkich podocytów nerkowych z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych: procedura ukierunkowanego różnicowania dojrzałych podocytów nerkowych z komórek macierzystych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:19 min. • April 30th, 2023
Dojrzałe komórki można przeprogramować, aby odzyskały stan niezróżnicowany i proliferacyjny podobny do komórek macierzystych. Te przeprogramowane komórki nazywane są indukowanymi pluripotencjalnymi komórkami macierzystymi lub IPSC. Aby zróżnicować komórki pluripotencjalne w wyspecjalizowane w podocytach komórki zaangażowane w filtrację odpadów z nerek, zacznij od pobrania zawiesiny ludzkich IPSC w pożywce do indukcji mezodermy.
Przenieść tę zawiesinę na płytkę hodowlaną pokrytą matrycą podstawową i inkubować. Matryca podstawowa ułatwia przyleganie IPSC u podstawy. Następnie specyficzne czynniki obecne w pożywce indukują różnicowanie IPSC w komórki mezodermy, komórki prekursorowe dla podocytów. Odessać zużyty nośnik.
Uzupełnić płytkę pożądaną objętością pożywki do indukcji mezodermy i inkubować przez dłuższy czas. Ten etap prowadzi do różnicowania komórek mezodermalnych w niedojrzałe podocyty. Zastąp pośrednią pożywkę indukcyjną mezodermy roztworem trypsyny, aby oddzielić przylegające komórki od płytki.
Następnie odwirować w celu granulacji komórek. Odrzucić sklarowany osad zawierający roztwór trypsyny i fragmenty matrycy. Zawiesić osad w pożywce do indukcji podocytów. Przenieść zaw
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych