Izolacja komórek mięśni gładkich Detrusor: procedura trawienia enzymatycznego w celu uzyskania komórek DSM z próbek ludzkiego pęcherza moczowego

Komórki mięśni gładkich wypieracza (DSM) obecne w ścianie pęcherza moczowego stanowią podstawową jednostkę funkcjonalną pęcherza moczowego. Komórki te rozluźniają się, aby ułatwić magazynowanie moczu w pęcherzu i kurczą się, aby uwolnić mocz.

Aby wyizolować komórki DSM, zacznij od pobrania pobranej próbki ludzkiego pęcherza moczowego. Umyj próbkę, aby usunąć wszelkie ślady krwi i zanieczyszczeń. Następnie zabezpiecz tkankę powierzchnią błony śluzowej skierowaną do góry. Wytnij tłuszcz, naczynia krwionośne i warstwę błony śluzowej, aby odsłonić leżącą pod spodem warstwę mięśni wypieracza. Następnie pokrój tkankę pozbawioną błony śluzowej na małe fragmenty.

Potraktuj fragmenty tkanek koktajlem trawiennym zawierającym papainę i inkubuj. Papaina, enzym proteolityczny, wspomaga trawienie białek w macierzy zewnątrzkomórkowej, które utrzymują komórki razem i inicjują rozluźnienie komórek w macierzy. Teraz usuń supernatant zawierający papainę.

Dodać zawiesinę enzymu kolagenazy do fragmentów tkanek i inkubować w temperaturze fizjologicznej. Kolagenaza rozbija macierz zewnątrzkomórkową i ułatwia dysocjację komórek DSM. Inkubacja w temperaturze fizjologicznej pomaga zachować integralność komó