Analiza perforowanego zacisku krosowego za pośrednictwem amfoterycyny-B: elektrofizjologiczna technika badania prądów jonowych w komórkach pęcherza moczowego

Technika perforowanego patch-clamp umożliwia pomiary w czasie rzeczywistym prądów jonowych związanych z aktywnością kanałów jonowych na komórkach takich jak detruzja mięśni gładkich lub DSM pęcherza moczowego.

Na początek załaduj zawiesinę komórek DSM do szklanej komory i inkubuj, aby umożliwić przyleganie komórek. Następnie dodaj roztwór zewnątrzkomórkowy zawierający jony tetraetyloamonu i cezu do przylegających komórek. Kationy te blokują kanały potasowe na błonie komórkowej i hamują zakłócające prądy potasowe.

Następnie weź wypolerowaną pipetę z zaciskiem krosowym - cienką, pustą szklaną rurkę zawierającą elektrodę nagrywającą podłączoną do wzmacniacza. Napełnij pipetę z przodu roztworem wewnątrzkomórkowym i wypełnij ją tym samym roztworem, ale zawierającym amfoterycynę-B, antybiotyk perforujący błonę.

Teraz zanurz końcówkę pipety w roztworze zewnątrzkomórkowym zawierającym komórki DSM. Po ustawieniu potencjału i prądu na odpowiednich poziomach należy przesunąć końcówkę pipety w kierunku błony komórkowej i jednocześnie monitorować rezystancję elektrody.

Szybki wzrost wartości oporu wskazuje, że końcówka pipety dotarła do błony komórkowej. Teraz delikatnie przysłać elektrodę, aby