Izolacja kłębuszków nerkowych: technika uzyskiwania nienaruszonych kłębuszków nerkowych z mysiej nerki

W nerkach kręgowców nefrony składają się z wielu kłębuszków nerkowych - gęstej sieci naczyń krwionośnych - które odgrywają podstawową rolę w filtracji odpadów z organizmu.

Aby wyizolować kłębuszki nerkowe, zacznij od pobrania świeżo wypreparowanej nerki myszy. Za pomocą kleszczy odklej kapsułkę nerkową od nerki i umieść czystą nerkę w nowym naczyniu hodowlanym. Teraz umieść naczynie nad lodem, aby uniknąć degradacji nerek. Zmiel nerkę na małe kawałki.

Następnie ponownie zawieś zmielone kawałki nerki w odpowiednim roztworze buforowym. Przefiltruj zawiesinę tkankową przez duży filtr siatkowy i zbierz przepływ do świeżego naczynia. Powtórz ten krok jeszcze kilka razy, za każdym razem stopniowo zmniejszając rozmiar oczek, aż kłębuszki nerkowe oddzielą się od fragmentów nerki.

Na koniec umyj filtr żądaną pożywką hodowlaną, aby zebrać mniejsze uwięzione kłębuszki nerkowe, podczas gdy fragmenty nerek pozostają w filtracie. Przenieś kłębuszki nerkowe na bardzo niską płytkę mocującą. Wizualizuj płytkę za pomocą mikroskopu z odwróconym światłem.

Za pomocą mikropipety uchwyć pojedynczy kłębuszek nerkowy i przenieś go do świeżej studzienki. Uzupełnij studzienkę pożywkami hodowlanymi i użyj izo