Dostarczanie plazmidów DNA do nabłonka dróg moczowych pęcherza myszy: procedura oparta na elektroporacji mająca na celu skuteczne dostarczanie plazmidów DNA do komórek urotelialnych pęcherza myszy w celu wygenerowania modeli modyfikowanych genetycznie

Na początek przygotuj znieczuloną samicę myszy w pozycji leżącej. Upewnij się, że jego pęcherz jest całkowicie pusty. Przez otwór cewki moczowej wprowadzić nasmarowany cewnik. Smarowanie pomaga w płynnym przejściu cewki moczowej w celu wejścia do pęcherza.

Po cewnikowaniu wykonaj nacięcie brzucha i wypreparuj mięśnie wewnętrzne, aby odsłonić pęcherz. Następnie odpipetować zawiesinę plazmidów DNA zmieszanych z odpowiednim barwnikiem do zewnętrznego końca cewnika. Te plazmidy DNA kodują fluorescencyjny gen reporterowy.

Przymocuj strzykawkę do cewnika i wepchnij ją, aby dostarczyć roztwór plazmidu do pęcherza. Wstrzyknięte cząsteczki barwnika barwią pęcherz moczowy, potwierdzając pomyślne podanie roztworu plazmidu. Wyjmij zespół cewnika i dokręć zewnętrzny otwór cewki moczowej, aby zapobiec wypływaniu roztworu plazmidu.

Teraz uszczypnij pęcherz za pomocą dwóch elektrod podłączonych do generatora elektroporacji. Przyłóż impulsy elektryczne o odpowiednim napięciu przez żądany okres do pęcherza. Wystawienie nabłonka dróg moczowych, najbardziej wewnętrznej wyściółki pęcherza moczowego, na działanie zastosowanych pól elektrycznych, powoduje powstawanie tymczasowych porów w błonie komórkowe