JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:11 min. • April 30th, 2023
Egzosomy - nano-rozmiarowe, połączone błoną pęcherzyki, które przenoszą funkcjonalne biomolekuły - są aktywnie wydzielane przez większość typów komórek i mogą być izolowane z supernatantów do hodowli komórkowych in vitro. Aby wyizolować egzosomy, najpierw zbierz supernatant lub kondycjonowane podłoże z hodowli komórkowej, która Cię interesuje. Kondycjonowane podłoże zawierałoby egzosomy, białka, szczątki komórkowe i pęcherzyki.
Odwirować pożywkę, aby osadzać resztki komórkowe. Zbierz supernatant zawierający egzosom i przefiltruj go przez sitka komórkowe, aby usunąć większe pęcherzyki. Przenieś określoną objętość przefiltrowanego medium do świeżej probówki. Następnie należy wymieszać odpowiednie stężenia sacharozy i tlenku deuteru, aby przygotować poduszkę sacharozową - nieciągły gradient sacharozy.
Dodać określoną objętość roztworu poduszki sacharozowej do probówki zawierającej pożywkę; roztwór tworzy oddzielną warstwę na dnie. Teraz odwiruj probówkę z dużą prędkością. Poduszka sacharozowa ułatwia migrację egzosomów z pożywki do roztworu sacharozy przy jednoczesnym zachowaniu integralności egzosomu. Zanieczyszczenia białkowe o dużej gęstości zajmują granicę faz między roztworem sac
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych