JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:04 min. • April 30th, 2023
Egzosomy - nano-rozmiarowe pęcherzyki błonowe pochodzenia komórkowego - wykazują potencjał jako terapeutyczne nośniki dla dwuniciowych małych interferujących RNA lub siRNA.
Po uwolnieniu do cytoplazmy komórki docelowej siRNA wiąże się z kompleksem wyciszającym indukowanym przez RNA. Aktywowany kompleks następnie rozpoznaje i wiąże się ze specyficznym mRNA, negatywnie regulując jego ekspresję i pośrednicząc w wyciszaniu genów.
Aby zakapsułkować siRNA w egzosomach, najpierw schłodzić kuwetę do elektroporacji na lodzie. Następnie wymieszaj egzosomy i specyficzne siRNA w probówce w żądanym stosunku za pomocą odpowiedniego buforu do elektroporacji. Teraz przenieś tę mieszaninę do wstępnie schłodzonej kuwety.
Zamknij kuwetę i umieść ją w uchwycie kuwety elektroporatora. Obróć pokrętło obrotowe, aby upewnić się, że kuweta styka się z elektrodami elektroporacyjnymi. Teraz uruchom wybrany program do elektroporacji.
Podczas elektroporacji impulsy elektryczne zaburzają dwuwarstwę fosfolipidową egzosomów zawieszonych w buforze przewodzącym. Powoduje to tworzenie się przejściowych porów w błonie egzosomu, sprzyjających dyfuzji siRNA do pęcherzyka. Bufor pomaga zapobiegać agregacji siRNA.
Po zak
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych