Izolacja mysich komórek nerkowych: technika izolowania i generowania pierwotnej kultury komórek nabłonka kanalików nerkowych

Aby wyizolować komórki nabłonka kanalików nerkowych lub TEC, zacznij od pobrania świeżo wyizolowanej nerki myszy na szalce Petriego. Oderwij torebkę nerkową - cienką zewnętrzną warstwę otaczającą nerkę - i usuń rdzeń lub najbardziej wewnętrzną część nerki, pozostawiając korę zawierającą kanaliki i komórki nabłonka kanalików.

Pozostałe części nerki należy rozdrobnić na małe kawałki i inkubować w ciepłym buforze do trawienia zawierającym enzym kolagenazę. Kolagenaza rozkłada białko kolagenowe, które utrzymuje razem tkanki nerkowe, uwalniając kanaliki nerkowe i komórki nerkowe do zawiesiny.

Przefiltrować zawiesinę, aby usunąć niestrawione tkanki nerkowe. Następnie dodać wstępnie schłodzone pożywki hodowlane do filtratu. Niższa temperatura neutralizuje kolagenazę i zatrzymuje dalsze trawienie tkankowe. Odwirować filtrat z małą prędkością, aby umożliwić gęstsze kanaliki i komórki rurkowe osiadanie, podczas gdy inne typy komórek i zanieczyszczenia pozostają zawieszone.

Usunąć tę niepożądaną frakcję supernatantu i dodać pożywkę hodowlaną w celu ponownego zawieszenia osadu. Wysiać zawiesinę w naczyniu hodowlanym pokrytym kolagenem i inkubować. Wolne komórki kanalikowe mocno przyczepiają si