Izolacja mysich komórek nerkowych: technika izolowania i generowania pierwotnej kultury komórek nabłonka kanalików nerkowych

0 wyświetleń3:21 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby wyizolować komórki nabłonka kanalików nerkowych lub TEC, zacznij od pobrania świeżo wyizolowanej nerki myszy na szalce Petriego. Oderwij torebkę nerkową - cienką zewnętrzną warstwę otaczającą nerkę - i usuń rdzeń lub najbardziej wewnętrzną część nerki, pozostawiając korę zawierającą kanaliki i komórki nabłonka kanalików.

Pozostałe części nerki należy rozdrobnić na małe kawałki i inkubować w ciepłym buforze do trawienia zawierającym enzym kolagenazę. Kolagenaza rozkłada białko kolagenowe, które utrzymuje razem tkanki nerkowe, uwalniając kanaliki nerkowe i komórki nerkowe do zawiesiny.

Przefiltrować zawiesinę, aby usunąć niestrawione tkanki nerkowe. Następnie dodać wstępnie schłodzone pożywki hodowlane do filtratu. Niższa temperatura neutralizuje kolagenazę i zatrzymuje dalsze trawienie tkankowe. Odwirować filtrat z małą prędkością, aby umożliwić gęstsze kanaliki i komórki rurkowe osiadanie, podczas gdy inne typy komórek i zanieczyszczenia pozostają zawieszone.

Usunąć tę niepożądaną frakcję supernatantu i dodać pożywkę hodowlaną w celu ponownego zawieszenia osadu. Wysiać zawiesinę w naczyniu hodowlanym pokrytym kolagenem i inkubować. Wolne komórki kanalikowe mocno przyczepiają się do kolagenu, podczas gdy kanaliki pozostają zawieszone. Subkultura w celu usunięcia nieprzyłączonych kanalików i uzyskania pierwotnej kultury komórek nabłonka kanalików.

Aby przetworzyć pobrane nerki, najpierw usuń torebki nerkowe i rdzeń. Następnie zmiel obie nerki na drobne kawałki i inkubuj je w 10 mililitrach buforu wytrawiającego w piekarniku o temperaturze 37 stopni Celsjusza z delikatnymi obrotami przez 5 minut.

Po strawieniu usuń wszelkie niestrawione tkanki, przepuszczając bufor przez filtr o średnicy 70 mikronów. Po zebraniu strawionej tkanki dodaj 10 mililitrów pożywki hodowlanej, aby zatrzymać trawienie. Następnie odwirować przefiltrowaną zawiesinę tkankową o sile 50 x g przez 5 minut, aby osadzać komórki rurkowe. Następnie przenieś supernatant do nowej probówki, dodaj 5 mililitrów pożywki hodowlanej i powtórz wirowanie, aby zebrać pozostałe komórki rurkowe.

Teraz ponownie zawieś pierwszą osadkę w 20 mililitrach pożywki hodowlanej i odwiruj ją przy 50 x g przez 5 minut, aby dalej oczyścić zebrane komórki. Usunąć supernatant. Następnie ponownie zawieś oba osady w 10 mililitrach pożywki hodowlanej. Następnie policz żywe komórki za pomocą barwienia błękitem trypanowym. Następnie umieść do 10 milionów komórek na 60-milimetrowym naczyniu pokrytym kolagenem i pozwól komórkom rurkowym przyczepić się przez noc.

09:00

Mikrodysekcja pierwotnych segmentów tkanki nerkowej i włączenie do niej nowatorskiej technologii konstrukcji bez rusztowań

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:14

Skuteczna metoda przesiewania w celu odizolowania nienaruszonych kłębuszków nerkowych z nerki dorosłego szczura

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:18

Izolacja i hodowla pierwotnych neuronów i gleju z pęcherza moczowego dorosłego szczura

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:06

Izolacja i hodowla komórek ze strefy nerkopochodnej embrionalnej nerki myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:35

Izolacja kłębuszków nerkowych: technika uzyskiwania nienaruszonych kłębuszków nerkowych z mysiej nerki

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:43

Repopulacja komórek nabłonkowych i przygotowanie rusztowań macierzy zewnątrzkomórkowej gryzoni do rozwoju tkanki nerkowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:30

Sekcja i hodowla embrionalnej nerki myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:40

Izolacja, charakterystyka i wysokoprzepustowa analiza strumienia zewnątrzkomórkowego pierwotnych komórek nabłonka kanalików nerkowych myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:32

Rozwój hodowli pierwotnych komórek nabłonka ludzkich kanalików nerkowych w warunkach jednowarstwowych i trójwymiarowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:06

Izolacja pierwotnych komórek nabłonka nabłonka proksymalnego ludzkiego i ich zastosowanie w tworzeniu mikrofizjologicznego modelu kanału bliższego nerki

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026