Hydrodynamiczne wstrzyknięcie do miednicy nerkowej: technika bezpośredniego dostarczania DNA do komórek nerkowych modelu mysiego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:36 min. • April 30th, 2023
Aby dostarczyć plazmidowe DNA bezpośrednio do komórek nerkowych myszy, zacznij od umieszczenia znieczulonej myszy w pozycji bocznej. Przygotuj mysz, usuwając jej futro grzbietowe z boku. Zlokalizuj odpowiednie miejsce nacięcia na lewym boku, poniżej klatki piersiowej.
Zrób małą szczelinę w skórze i leżących pod nią warstwach mięśni. Następnie delikatnie uciskaj jamę brzuszną, aby odsłonić nerkę przez miejsce nacięcia. Częściowo usuń nakładającą się tkankę tłuszczową okołonerkową, aby uwidocznić miedniczkę nerkową.
Teraz weź strzykawkę zawierającą plazmidowe DNA w hydrodynamicznym buforze dostarczającym. Wbij igłę bezpośrednio do miedniczki nerkowej - trójkątnej, rozszerzonej części moczowodu w nerce. Szybko wstrzyknąć roztwór plazmidu tak, aby DNA bezpośrednio dotarło do miąższu nerki - funkcjonalnej części nerki, która filtruje krew.
Szybkie dostarczanie dużej objętości płynu przez miedniczkę nerkową wytwarza wysokie ciśnienie, tworząc przejściowe pory w błonie komórkowej komórek miąższowych nerek. Ułatwia to wnikanie plazmidów do komórek. W końcu pory te zamykają się, więżąc plazmidy w komórkach.
Na koniec wycofaj igłę i wróć nerkę do jamy brzusznej. Zszyj warstwy skóry i mięśni
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych