Patologia ekspansji: metoda obrazowania optycznego w wysokiej rozdzielczości klinicznych próbek tkanek
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:14 min. • April 30th, 2023
Patologia ekspansji (ExPath) to technika przygotowania próbek biologicznych, która umożliwia konwencjonalnej mikroskopii świetlnej obrazowanie struktur w skali nano poprzez ich rozszerzanie za pomocą systemu polimerowego.
Najpierw weź przetworzoną próbkę tkanki barwionej immunologicznie i przykryj ją roztworem kotwiczącym zawierającym zarówno grupy białkowe, jak i reagujące z polimerami. Grupa reagująca z białkiem odczynnika kotwiczącego wiąże się z aminami biomolekuł w komórkach.
Następnie dodać odpowiedni roztwór żelujący na próbkę i inkubować, aby umożliwić jego dyfuzję wewnątrz tkanki. Grupa reagująca z polimerem odczynnika kotwiącego wiąże się z wolnymi monomerami w roztworze żelującym, umożliwiając biomolekułom zakotwiczenie się w polimerze podczas jego polimeryzacji.
Po zakończeniu polimeryzacji próbki przykryj szkiełko roztworem proteinazy. Proteinazy trawią białka cytoszkieletu w celu usunięcia oporu strukturalnego, umożliwiając komórkom rozszerzanie się bez pękania. Po trawieniu enzymatycznym zżelowana próbka odrywa się od szkiełka i przemieszcza się do zawiesiny.
Teraz przenieś próbkę do odpowiedniego bufora do płukania w pojemniku kompatybilnym z mikroskopem. Następnie
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych