JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 6:23 min. • April 30th, 2023
Mikroglej to makrofagi mózgowe, które pomagają usuwać patogeny, szczątki komórkowe i rakowe komórki nerwowe lub nerwiaka zarodkowego w procesie zwanym fagocytozą.
Aby naśladować fagocytozę in vitro, zacznij od hodowli komórek nerwiaka zarodkowego utrwalonych w paraformaldehydzie.
Paraformaldehyd, chemiczny utrwalacz, powoduje losową dystrybucję fosfolipidów błonowych, takich jak fosfatydyloseryna, powodując ich translokację na zewnętrzną powierzchnię błony komórkowej, jednocześnie stabilizując strukturę komórki.
Teraz dodaj wrażliwy na pH aminowo-reaktywny barwnik fluorescencyjny do hodowli komórek nerwiaka zarodkowego i inkubuj.
Cząsteczki barwnika wiążą się z grupami aminowymi fosfatydyloseryny na powierzchni komórki nerwiaka zarodkowego.
Odwirować probówkę i usunąć supernatant zawierający niezwiązane cząsteczki barwnika. Przepłukać osad komórkowy odpowiednim buforem i odwirować.
Usunąć supernatant i ponownie zawiesić osad w pożywce hodowlanej.
Następnie wysiewaj wstępnie wybarwione makrofagi na płytce hodowlanej. Barwione makrofagi będą miały kolor czerwony z niebieskim jądrem.
Dodaj barwione komórki nerwiaka zarodkowego do tej kultury i inkubuj.
Receptory makrofagowo-fagocytarn
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych