Donosowe dostarczanie terapeutycznych nerwowych komórek macierzystych (NSC) w modelu mysim: procedura ukierunkowanego na nowotwór dostarczania NSC załadowanych wirusem onkolitycznym do mysiego modelu zawierającego guz mózgu

Na początek poddaj hodowlę nerwowych komórek macierzystych lub NSC warunkom niskiego poziomu tlenu. To wstępne kondycjonowanie ułatwia zwiększoną proliferację NSC i zdolności do celowania w nowotwór. Następnie należy pobrać NSC i potraktować pożądanym stężeniem warunkowo replikującego się wirusa onkolitycznego. Inkubuj, aby załadować wirusy do komórek.

Teraz odwiruj kulturę, aby usunąć niezwiązane wirusy. Ponownie zawiesić NSC załadowane wirusem w odpowiednim buforze. W międzyczasie umieść znieczuloną mysz z guzem mózgu w pozycji leżącej, aby uzyskać łatwiejszy dostęp do nozdrzy. Ostrożnie podawaj NSC załadowane wirusem do każdego nozdrza myszy, powtarzając w krótkich odstępach czasu.

Pozwól myszy na odzyskanie sprawności. Podawane donosowo NSC w jamie nosowej omijają barierę krew-mózg, aby dostać się do mózgu. Wewnątrz mózgu wirus replikuje się w tych wstępnie uwarunkowanych komórkach i migruje do miejsca guza, chroniąc się przed układem odpornościowym. Z biegiem czasu cząsteczki wirusa uwalniane z NSC oddziałują i wiążą się ze specyficznymi receptorami na powierzchni komórek z nadekspresją na komórkach nowotworowych.

Po internalizacji wirusa, te warunkowo replikujące się wirusy preferencyjnie replikują się w komórkach nowotworowych i powodują lizę komórek. Lizowane komórki nowotworowe uwalniają cząsteczki wirusa, które infekują otaczające komórki nowotworowe, prowadząc do kaskady infekcji i lizy komórek nowotworowych. Liza komórek odsłania antygeny nowotworowe, aktywując odpowiedź immunologiczną przeciwko komórkom nowotworowym.

Aby załadować ludzkie nerwowe komórki macierzyste wirusem onkolitycznym należy zainfekować komórki macierzyste 50 warunkowymi powtórzeniami cząstek wirusa adenowirusa na komórkę zgodnie ze standardowymi protokołami transfekcji adenowirusa przez 2 godziny w temperaturze pokojowej z okresowym opukiwaniem. Następnie umyj komórki trzykrotnie świeżą pożywką, aby usunąć wszelkie niezwiązane cząstki wirusa i zawiesić komórki w sterylnym roztworze soli fizjologicznej do podania donosowego.

Kiedy komórki zostały zmodyfikowane zgodnie z eksperymentalnie odpowiednimi potrzebami, umieść znieczulone zwierzęta z guzem w pozycji leżącej na czystej serwicie na poduszce grzewczej i umieść wyściełaną poduszkę pod głowami, aby utrzymać nozdrza pod kątem prostym. Materiał poduszki powinien być albo z plastiku przecieranego alkoholem, albo z jednorazowych zwiniętych ręczników papierowych, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego zwierząt.

Gdy myszy znajdą się na swoim miejscu, użyj mikropipety, aby dozować 2 mikrolitry eksperymentalnej populacji ludzkich nerwowych komórek macierzystych będących przedmiotem zainteresowania do każdego nozdrza pierwszej myszy, wizualnie potwierdzając aspirację kropli przed zastosowaniem następnej objętości komórek. Powtórz dostarczanie do każdej myszy po kolei. Następnie odczekaj 5 minut i zastosuj następną rundę komórek. Po podaniu wszystkich czterech serii komórek umieścić zwierzęta w komorze regeneracyjnej z monitorowaniem aż do całkowitego wyzdrowienia.

• Neural Stem Cells (NSCs) - Preconditioned cells exposed to low oxygen for improved proliferation.
• Cell Washing Procedure - A method to remove unbound entities, in this context, virus.
• Stem Cell Flow Chart - A graphical representation to outline the stem cell procedures.
• Murine Stem Cell Virus - An oncolytic virus used in research for its tumor-targeting properties.
• Stem Cell Delivery - Process of injecting stem cells (here, into nostrils).

• Introduce NSCs - Neural stem cells enhanced for tumor-targeting (e.g., NSCs).
• Key Concepts - Overview of oncolytic virus utilization within NSCs (e.g., theory of stem cell delivery).
• Underlying Mechanisms - NSCs carry virus to brain tumors, leading to cell lysis (e.g., mechanisms of murine stem cell virus).
• Connect to Experiment - Experiment uses virus-loaded NSCs injected into mice nostrils, targets brain tumor.

• [Question 1] What are neural stem cells and how do they target tumors?
• [Question 2] How does the process of cell washing work?
• [Question 3] What role does the murine stem cell virus play in tumor destruction?

• Practical Applications - Invasive brain tumor treatments (e.g., using NSCs).
• Industry Impact - Potential benefits for cancer treatment sectors (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improved life quality of brain tumor patients (e.g., via better treatment options).
• Link to Scientific Advancements - A step forward in oncolytic virus research and NSC technology.