Generowanie mikroguzów: technika hodowli in vitro do hodowli mikroguzów 3D w celu analizy odpowiedzi na leczenie farmakologiczne

Mikronowotwory - trójwymiarowe agregaty komórek nowotworowych in vitro - ściśle naśladują mikrośrodowisko guza in vivo i służą jako obiecujące platformy do oceny skuteczności leków. Aby wygenerować mikroguzy, zacznij od równomiernego zawieszenia komórek nowotworowych pochodzących od pacjenta.

Następnie rozcieńczyć zawiesinę komórkową o żądaną objętość schłodzonej macierzy zewnątrzkomórkowej pochodzenia ludzkiego lub ECM. Pipetować małe objętości tej mieszaniny komórkowo-matrycowej na niestandardową metalową płytkę zawierającą szpilki z powłoką hydrofobową. Hydrofobowa powłoka na kołkach pozwala kropelkom zachować swój kulisty kształt.

Inkubować, aby ułatwić żelowanie ECM, osadzając komórki w środku. Teraz przenieś osadzone w komórce kulki żelowe na płytkę hodowlaną o dużej objętości zawierającą odpowiednią pożywkę. Inkubuj przez żądany czas. W hodowli otorbione komórki zaczynają agregować się w macierzy ECM, która zapewnia środowisko dla niestymulowanego wzrostu komórek.

Dodatkowo składniki pożywki dyfundują przez matrycę i sprzyjają proliferacji komórek, ułatwiając im tworzenie trójwymiarowych mikroguzów w kulkach. Następnie przenieś kulki zawierające mikroguz na wielodołkową płyt