Prenatalne pobieranie zarodków myszy: procedura pobierania zarodków od ciężarnej myszy

Zarodki myszy są wykorzystywane jako systemy modelowe do badania wczesnej embriogenezy ssaków. Aby pobrać okołoporodowe zarodki myszy na pożądanym etapie rozwoju embrionalnego, należy rozpocząć od uśpionej ciężarnej myszy w pozycji leżącej.

Następnie wysterylizuj jego obszar brzucha i wykonaj poprzeczne nacięcie na ścianie brzucha, aby odsłonić leżące pod spodem rogi macicy. Rogi macicy to długie rurkowate struktury zawierające sznur zarodków. Teraz ostrożnie oddziel rogi macicy od brzucha, wycinając je z otaczającej tkanki.

Pobrane rogi macicy przenieść do naczynia zawierającego bufor. Opłucz rogi macicy, aby usunąć resztki tkanek i krew. Ponadto naciąć między miejscami implantacji wzdłuż rogów macicy, aby oddzielić każdy zarodek. Wytnij decidua, matczyną warstwę łożyska, wraz z krążkiem łożyskowym pochodzącym z zarodka.

Następnie usuń małą pozazarodkową błoniastą strukturę otaczającą zarodek, która go odżywia - woreczek żółtkowy. Na koniec usuń błonę owodniową - najbardziej wewnętrzną błonę pozazarodkową składającą się z wypełnionego płynem woreczka, który otacza i chroni zarodek - aby uwolnić zarodek myszy.

Odzyskane zarodki okołoporodowe mogą być wykorzystane do badania wczesnego rozwoju ssaków.

Wyczyść nożyczki preparacyjne i kleszcze 70% etanolem. Aby pobrać zarodki okołoporodowe w E18.5 lub E19.5, najpierw poddaj ciężarne myszy eutanazji za pomocą inhalacji dwutlenkiem węgla. Następnie należy wykonać zwichnięcie szyjki macicy zgodnie z wytycznymi NIH.

Następnie rozpyl 70% etanolu na brzuszną powierzchnię brzucha zwierzęcia. Następnie, za pomocą sterylnych nożyczek preparacyjnych i kleszczy, ostatecznie otwórz jamę brzuszną. Podnieś całą macicę i oddziel ją od ciała na końcach rogów macicy. Następnie przepłucz całą macicę 1x PBS na szalce Petriego.

Przeciąć macicę segmentowo nożyczkami preparacyjnymi i usunąć łożysko decidua za pomocą kleszczy preparacyjnych, aby odsłonić zarodki w woreczkach żółtkowych. Najpierw usuń woreczek żółtkowy, a następnie usuń błonę owodniową za pomocą kleszczy preparacyjnych, aby uwolnić zarodki okołoporodowe.