JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:53 min. • July 8th, 2025
Aby wyizolować jajniki nowonarodzonych myszy, zacznij od uśpionego nowonarodzonego szczeniaka myszy w pozycji leżącej na plecach na platformie chirurgicznej. Wykonaj długie nacięcie chirurgiczne na skórze i ścianie ciała, aby odsłonić jamę brzuszną. Następnie delikatnie przemieszcz jelita, aby odsłonić leżące pod spodem rogi macicy.
Rogi macicy to dwie długie struktury rurkowe, które zbiegają się w szyjce macicy i rozciągają się od pęcherza w kierunku nerek. Zidentyfikuj jajniki - małe, owalne gruczoły - znajdujące się tuż pod nerkami na końcu rogów macicy, połączonych jajowodami.
Teraz odetnij miejsce przyczepu jajnika od każdego rogu macicy, aby uwolnić jajniki. Natychmiast przenieś wycięte jajniki do sterylnego naczynia hodowlanego zawierającego odpowiednie, wstępnie podgrzane podłoże, aby utrzymać żywotność oocytów w tkance. Umieść naczynie hodowlane na rozgrzanym stoliku mikroskopu preparacyjnego.
Za pomocą igły ostrożnie usuń kaletkę jajnika, worek tkanki łącznej otaczający jajnik i wszelkie resztki jajowodu. Na koniec przenieś jajniki do wielodołkowej płytki zawierającej pożywkę. Izolowane jajniki można wykorzystać do dalszego przetwarzania.
Rozpocznij od przeniesienia 1 mililitra pożywki preparacyjnej do każdego sterylnego szklanego naczynia na zarodki. Po uboju szczeniąt w wieku od 0 do 5 dni po urodzeniu, chwyć skórę pokrywającą ścianę brzucha cienkimi kleszczami i naciąć skórę i ścianę ciała. Otwórz to duże nacięcie, odsłaniając brzuch. Pęcherz moczowy jest zwykle obrzęknięty na tym etapie i można go przebić, aby ułatwić rozwarstwienie.
Za pomocą kleszczy zegarmistrzowskich odsuń wnętrzności na bok. Następnie, po obu stronach, podążaj za rogami macicy od pęcherza moczowego do nerki. Jajnik jest strukturą przypominającą chmurę znajdującą się tuż pod nerką w górnej części macicy. Chwyć delikatnie jajnik i nożyczkami odetnij go od macicy. Po wypreparowaniu obu jajników przenieś je do naczyń wypełnionych ciepłym podłożem preparacyjnym.
Użyj mikroskopu preparacyjnego ze stolikiem podgrzanym do 37 stopni Celsjusza, aby wypreparować jajniki. Za pomocą igieł insulinowych odetnij worek kaletki maziowej i nadmiar materiału, w tym jajowód, aż pozostanie tylko jajnik. Następnie przenieś każdy jajnik do dołka przygotowanej płytki za pomocą zakrzywionej pipety.