JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 wyświetleń • 4:02 min • July 8th, 2025
Zacznij od znieczulonej samicy myszy w prawej pozycji bocznej na platformie chirurgicznej. Następnie ogol brzuch myszy i wysterylizuj obszar. Wykonaj nacięcie skóry przylędźwiowej i wypreparuj mięśnie brzucha, aby odsłonić jamę brzuszną.
Teraz zlokalizuj jedną z poduszek tłuszczowych jajnika - tkankę tłuszczową otaczającą jajniki. Janowody łączą jajniki z długimi strukturami rurkowymi zwanymi rogami macicy. Ponadto delikatnie zewnętrznij jajnik wraz z poduszeczką tłuszczową jajnika, umieszczając ją na mokrej gazie, aby utrzymać nawilżenie tkanki.
Teraz zidentyfikuj kaletkę jajnika - cienką błonę otaczającą jajnik i koniec jajowodu. Naciąć kaletkę naprzeciwko wnęki jajnika, która tworzy granicę między jajnikiem a więzadłem jajnika. Więzadło jajnika strukturalnie łączy jajnik z rogiem macicy.
Po odsłonięciu jajnika delikatnie wyjmij go z kaletki jajnika i zaciśnij na wnęce jajnika, aby wyciąć jajnik. Przenieść wycięty jajnik do płytki hodowlanej zawierającej schłodzoną sól fizjologiczną.
Nienaruszony jajnik myszy złożony z jednostek funkcjonalnych - pęcherzyków jajnikowych, z których każdy zawiera oocyt, należy przechowywać do czasu dalszego użycia.
Przed rozpoczęciem zabiegu należy potwierdzić odpowiedni poziom sedacji poprzez uszczypnięcie palca u nogi i nałożyć maść na oczy zwierzęcia. Umieść mysz w pozycji leżącej na stosie rozgrzanych ręczników papierowych i zaczynając tuż pod żebrami i przesuwając się dystalnie, użyj maszynki do strzyżenia włosów z ostrzem 40, aby usunąć 2 do 3 centymetrów kwadratowych włosów kilka milimetrów bocznych do linii środkowej po każdej stronie zwierzęcia, z 1 do 2 2-centymetrowym paskiem włosów zakrywającym linię środkową.
Po podaniu środka przeciwbólowego przenieś zwierzę na rozgrzane sterylne pole operacyjne w pozycji leżącej na plecach i użyj kawałka gazy nasączonej etanolem o wymiarach 2 na 2 centymetry, a następnie peelingu betadynowego w celu dezynfekcji obszaru operacyjnego. Następnie wykonaj od 1 do 1,5-centymetrowego nacięcia przylędźwiowego w jednym z obszarów chirurgicznych i dwa nożyczki, aby stępić skórę od leżącej poniżej powięzi.
Następnie wykonaj kolejne nacięcie przez powięź i tępo rozcięcie boczne pod powięzią tak powierzchownie, jak to możliwe, aż dojdziesz do jamy brzusznej. Umieść serwetę chirurgiczną z gazy o wymiarach 2 na 2 centymetry na nacięciu i zwilż gazę sterylnym roztworem soli fizjologicznej.
Za pomocą małych kleszczy zlokalizuj tkankę tłuszczową otaczającą jajnik i delikatnie wyciągnij poduszeczkę tłuszczową i jajnik na serwetę. Poduszka tłuszczowa jajnika będzie wydawała się bielsza niż otaczająca ją tkanka tłuszczowa. Umieść 1,5-calowy zacisk Bulldog na poduszce tłuszczowej, uważając, aby nie zasłaniać kaletki jajnika, aby utrzymać przewód na miejscu podczas zabiegu.
Użyj mikroskopu preparacyjnego, aby zidentyfikować kaletkę jajnika. Następnie chwyć kaletkę za pomocą dwóch kleszczyków zegarmistrzowskich i naciąć kaletkę po przeciwnej stronie niż wnęka jajnika, aby odsłonić jajnik.
Zanim zdecydujesz, gdzie rozerwać kaletkę, spróbuj wyobrazić sobie kieszeń w kaletce, w której umieścisz nowy jajnik przed szyciem. Otwieraj kaletkę tylko tak daleko, jak to konieczne, aby usunąć endogenny jajnik.
Delikatnie wyjmij jajnik z kaletki maziowej i zaciśnij wnękę jajnika kleszczami zegarmistrzowskimi, aby wyciąć jajnik i zapobiec krwawieniu. Następnie umieść jajnik dawcy w szkiełku zegarkowym zawierającym sterylny roztwór soli fizjologicznej o temperaturze 4 stopni Celsjusza i umieść luźną pokrywę na szkle.