JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 wyświetleń • 3:35 min • July 8th, 2025
Do implantacji pierścienia czaszkowego na czaszce myszy najpierw przygotuj znieczuloną mysz w pozycji leżącej. Następnie wykonaj pionowe nacięcie w linii środkowej, aby odsłonić calvarium – górną część czaszki, która chroni jamę czaszki otaczającą mózg.
Teraz ostrożnie usuń leżącą pod spodem okostną - gęstą warstwę naczyniowej tkanki łącznej - i wszelkie resztki tkanki, aby uzyskać optymalne obrazowanie. Oczyść odsłoniętą powierzchnię czaszki solą fizjologiczną.
Następnie nałóż klej cyjanoakrylowy na metalowy pierścień czaszki. Zamontuj go nad żądanym obszarem suchej, odsłoniętej czaszki.
Przytrzymaj pierścień na miejscu, aby mógł mocno przymocować się do czaszki. Utrzymuj powierzchnię czaszki nawilżoną solą fizjologiczną. Przymocuj pierścień do obszaru czaszki za pomocą cementu dentystycznego, aby zapobiec wyciekom podczas kolejnego obrazowania.
Napełnij pierścień solą fizjologiczną, która działa jak medium zanurzeniowe do mikroskopii o wysokiej rozdzielczości.
Przenieś mysz z pierścieniem czaszki na płytkę nośną przymocowaną do uchwytu bloku. Głowa myszy jest podniesiona, aby zapobiec oderwaniu się pierścienia od czaszki.
Zamocuj pierścień na uchwycie bloku, aby unieruchomić głowę myszy i zapobiec artefaktom ruchu wywołanym przez oddychanie podczas obrazowania. Ustaw podporę i zespół myszy do obrazowania przyżyciowego przez kość czaszki, co ułatwia wizualizację wyspecjalizowanych komórek i ich natywnego środowiska w czasie rzeczywistym w leżącym poniżej szpiku kostnym.
Zdezynfekuj skórę głowy 70% etanolem za pomocą ręcznika papierowego, jednocześnie usuwając luźne włosy. Użyj sterylnych cienkich nożyczek i pęsety, aby wykonać nacięcie w kształcie litery T na linii środkowej do 1 centymetra między uszami na skórze głowy, aby odsłonić kalwarię.
Odsłoń czaszkę pęsetą. Następnie za pomocą nożyczek i pęsety ostrożnie usuń okostną. Użyj sterylnego bawełnianego wacika nasączonego solą fizjologiczną, aby usunąć całą okostną i wszelkie zanieczyszczenia lub włosy, które mogłyby zmienić obrazowanie. Opłucz czaszkę solą fizjologiczną, aby usunąć wszelkie ślady krwi i szybko osusz kość bawełnianym wacikiem.
Nałóż klej w żelu na pierścień. Umieść pierścień na odsłoniętej kości i utrzymuj go przez kilka sekund, aby pierścień mocno przymocował się do czaszki. Lekko zwilż czaszkę wacikiem nasączonym solą fizjologiczną.
Przygotuj silikonową pastę dentystyczną, ostrożnie mieszając niebieskie i żółte składniki w stosunku 1 do 1. Uszczelnij pierścień, nakładając pastę dentystyczną, aby zapobiec wyciekom podczas obrazowania. Ostrożnie usuń pastę dentystyczną lub klej, które mogły dostać się do pierścienia. Następnie napełnij pierścień solą fizjologiczną, aby sprawdzić wyciek.
Umieść mysz na wsporniku i umieść złożony kompres pod głową zwierzęcia, aby podnieść głowę i zapobiec oderwaniu się pierścienia od czaszki po przymocowaniu do uchwytu. Przykręć pierścień do uchwytu bloku. Umieść wspornik i zespół myszy w podgrzewanej komorze mikroskopu.