Obrazowanie przyżyciowe: metoda obserwacji trzustki myszy na poziomie komórkowym przez ustabilizowane okno obrazowania

0 views • 3:40 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obrazowanie przyżyciowe polega na wizualizacji komórek żywego zwierzęcia przez okienko obrazowania wszczepione zwierzęciu. Umożliwia długotrwałą obserwację dynamiki komórek bez uszczerbku dla ich funkcji.

Na początek weźmy znieczuloną transgeniczną mysz, której wcześniej wszczepiono okienko obrazowania trzustki wsparte na metalowej płytce. Płytka podstawy przestrzennie oddziela trzustkę od jelit, redukując w ten sposób artefakty ruchowe wynikające z ruchów fizjologicznych, takich jak perystaltyka.

Transgeniczna mysz wykazuje ekspresję białka zielonej fluorescencji lub GFP pod promotorem genu insuliny ulegającym ekspresji w komórkach beta wysp trzustkowych.

Następnie mocno chwyć ogon myszy i spryskaj go środkiem dezynfekującym, aby usunąć wszelkie zanieczyszczenia powierzchniowe. Wprowadzić cewnik do żyły ogonowej bocznej. Wstrzyknąć roztwór zawierający przeciwciała oznaczone czerwoną sondą fluorescencyjną do żyły ogonowej. Przeciwciała te wiążą się z komórkami wyściełającymi naczynia krwionośne, barwiąc je na czerwono.

Teraz przesuń mysz do konfiguracji mikroskopii przyżyciowej. Włóż okienko do obrazowania trzustki do uchwytu okienka. Rozpocznij obrazowanie w małym powiększeniu, aby zlokalizować zielone fluorescencyjne skupiska wysp otoczone czerwonymi fluorescencyjnymi naczyniami krwionośnymi. Zwiększ powiększenie, aby uzyskać wysokiej jakości obrazowanie na poziomie komórkowym poszczególnych komórek beta.

Zacznij od włączenia mikroskopu przyżyciowego, w tym mocy lasera. Aby wprowadzić cewnik naczyniowy, należy uciskać palcem wskazującym i trzecim palcem na bliższą stronę ogona. W razie potrzeby podgrzej ogon lampą. Zdezynfekuj żyłę ogonową za pomocą sprayu z 70% etanolem, a następnie wprowadź cewnik o rozmiarze 30 do bocznej żyły ogonowej i uwidocznij niedomykalność krwi w probówce PE-10. Nałóż jedwabną taśmę na cewnik, aby go ustabilizować.

Wstrzyknąć dekstran FITC i dekstran TMR lub inne sondy fluorescencyjne, w zależności od przypadku, w zależności od kombinacji sond fluorescencyjnych. Włóż sondę doodbytniczą, aby automatycznie kontrolować temperaturę ciała za pomocą homeotermicznego systemu poduszek grzewczych. Następnie należy włożyć okienko do obrazowania trzustki przygotowane podczas ustawiania mikroskopii przyżyciowej do uchwytu okienka. Przenieś mysz z platformy chirurgicznej na etap obrazowania.

Aby wykonać obrazowanie przyżyciowe, zacznij od obrazowania trzustki w małym powiększeniu, na przykład czterokrotnie, aby zeskanować cały widok trzustki w okienku obrazowania trzustki. Po określeniu obszaru zainteresowania przełącz się na soczewkę obiektywową o większym powiększeniu, na przykład 20 lub 40 razy, aby wykonać obrazowanie na poziomie komórkowym z rozdzielczością boczną i osiową odpowiednio około 0,5 mikrometra i 3 mikrometrów.

Wykonaj obrazowanie z-stack lub poklatkowe, aby obserwować strukturę 3D lub dynamikę na poziomie komórkowym, taką jak migracja komórek.

08:23

Mikroskopia przyżyteczna do obrazowania struktur subkomórkowych u żywych myszy wykazujących ekspresję białek fluorescencyjnych

Related Videos

0 Views

11:44

Długoterminowe przyżyciowe obrazowanie mikroskopii wielofotonowej komórek odpornościowych w zdrowej i chorej wątrobie przy użyciu myszy reporterowych CXCR6.Gfp

Related Videos

0 Views

09:17

Podłużne obrazowanie przyżyciowe zachowania komórek guza mózgu w odpowiedzi na inwazyjną biopsję chirurgiczną

Related Videos

0 Views

03:45

Instalacja okna obrazowania przyżyciowego trzustki w modelu mysim: zintegrowane okno obrazowania trzustki do poklatkowego obrazowania in vivo mikrostruktury mysiej trzustki

Related Videos

0 Views

08:03

Obrazowanie dynamiki wapnia w subpopulacjach komórek wysp trzustkowych myszy

Related Videos

0 Views

06:52

Stabilizowana podłużna wizualizacja trzustki na poziomie komórkowym in vivo w modelu mysim z oknem obrazowania przyżyciowego trzustki

Related Videos

0 Views

07:44

Podłużne obrazowanie przyżyciowe przez przezroczyste okienka silikonowe

Related Videos

0 Views

07:12

Stabilizowane okienko do przyżyciowego obrazowania mysiej trzustki

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026