JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:40 min. • July 8th, 2025
Obrazowanie przyżyciowe polega na wizualizacji komórek żywego zwierzęcia przez okienko obrazowania wszczepione zwierzęciu. Umożliwia długotrwałą obserwację dynamiki komórek bez uszczerbku dla ich funkcji.
Na początek weźmy znieczuloną transgeniczną mysz, której wcześniej wszczepiono okienko obrazowania trzustki wsparte na metalowej płytce. Płytka podstawy przestrzennie oddziela trzustkę od jelit, redukując w ten sposób artefakty ruchowe wynikające z ruchów fizjologicznych, takich jak perystaltyka.
Transgeniczna mysz wykazuje ekspresję białka zielonej fluorescencji lub GFP pod promotorem genu insuliny ulegającym ekspresji w komórkach beta wysp trzustkowych.
Następnie mocno chwyć ogon myszy i spryskaj go środkiem dezynfekującym, aby usunąć wszelkie zanieczyszczenia powierzchniowe. Wprowadzić cewnik do żyły ogonowej bocznej. Wstrzyknąć roztwór zawierający przeciwciała oznaczone czerwoną sondą fluorescencyjną do żyły ogonowej. Przeciwciała te wiążą się z komórkami wyściełającymi naczynia krwionośne, barwiąc je na czerwono.
Teraz przesuń mysz do konfiguracji mikroskopii przyżyciowej. Włóż okienko do obrazowania trzustki do uchwytu okienka. Rozpocznij obrazowanie w małym powiększeniu, ab
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych