Model perfuzji antegrade: technika ex vivo perfuzji izolowanego serca myszy

Zacznij od umieszczenia znieczulonej myszy w pozycji leżącej. Wypreparuj klatkę piersiową, aby uwidocznić serce. Użyj pipety wyposażonej w końcówkę o szerokim otworze, aby wywrzeć ciśnienie ssania i zassać serce z ciała myszy do końcówki. Wytnij serce w aorcie, aby zebrać je z ciała myszy.

Zanurz wyizolowane serce w zlewce zawierającej bogaty w składniki odżywcze bufor uzupełniony środkiem przeciwzakrzepowym. Antykoagulant w buforze tworzy kompleks z wapniem obecnym w kardiomiocytach - komórkach mięśnia sercowego, zatrzymując skurcze mięśnia sercowego i zapobiegając krzepnięciu krwi.

Następnie umieść serce wierzchołkiem do dołu na stojaku na serce trzymanym na szalce Petriego zawierającej odpowiedni bufor. Zacisnąć aortę nad przedsionkami i przenieść zaciśnięte serce na płytkę perfuzyjną.

Następnie należy pobrać zestaw strzykawka-igła zawierający odpowiedni bufor perfuzyjny. Wbić igłę do lewej komory, przebijając komorę komorową.

Gdy aorta jest zaciśnięta, wstrzyknięcie dokomorowe powoduje ciśnienie w zastawkach aortalnych, aby się otworzyły. W konsekwencji bufor wypłukuje krew do przodu przez tętnice wieńcowe, dokładnie perfundując mięsień sercowy. Na koniec bufor wylewa się przez żyły płucne. Zapewnia to pomyślnie perfundowane serce do dalszych zastosowań.

W przypadku pobrania serca myszy, po potwierdzeniu eutanazji i ogoleniu brzucha, szybko otwórz klatkę piersiową, aby odsłonić serce, i użyj plastikowej pipety transferowej z końcówką przyciętą w przybliżeniu do rozmiaru serca, aby zassać serce do pipety. Podnieś pipetę, aby zrobić wystarczająco dużo miejsca na włożenie zakrzywionych nożyczek i użyj nożyczek, aby wyciąć serce od strony grzbietowej, uważając, aby nie uszkodzić przedsionków.

Natychmiast umieść serce w 30-mililitrowej szklanej zlewce zawierającej lodowaty CIB EGTA na około 1 minutę. Kiedy skurcze ustaną, umieść serce w 35-mililitrowym naczyniu hodowlanym zawierającym lodowaty CIB EGTA i usuń płuca i inne widoczne tkanki.

Umieść grubo oczyszczone serce na stojaku na serce wypełnionym schłodzonym CIB EGTA, wierzchołkiem do dołu i umieść stojak pod mikroskopem stereoskopowym. Usuń tłuszcz i tkankę łączną z okolic aorty. Jeśli długość przeciętej aorty jest zbyt długa, przytnij aortę tuż pod tętnicą ramienno-głowową i ustaw serce tak, aby przednia powierzchnia była skierowana do przodu. Użyj pęsety, aby podnieść koniec aorty i użyj małego zacisku naczyniowego, aby zacisnąć aortę w pobliżu przedsionków, delikatnie naciskając na przedsionki.

Następnie umieść zaciśnięte serce na płytce perfuzyjnej, przednią stroną skierowaną do góry, i nawodnij serce kilkoma kroplami CIB EGTA. W celu perfuzji skierowanej do przodu należy załadować strzykawkę o pojemności 20 mililitrów zawierającą wstępnie podgrzany CIB EGTA podłączoną do elastycznej rurki przedłużającej i oznaczonej igły do wstrzykiwań na pompę infuzyjną i uruchomić pompę przy natężeniu przepływu 0,5 mililitra na minutę. Po napełnieniu igły i pompki należy umieścić igłę do wstrzykiwań na płytce perfuzyjnej krótszym bokiem ukośnej z przodu i przesuwać igłę tak, aż dotknie wierzchołka serca.

Ostrożnie wprowadzić igłę w pobliżu wierzchołka lewej komory, do komory komorowej, nie skręcając ani nie odrywając igły od płytki, obserwując znak, aby oszacować głębokość wkłucia igły. Po zakończeniu wprowadzania igły krew powinna zacząć wypływać z tętnicy wieńcowej.

Za pomocą taśmy przymocuj igłę do płytki i zwiększ prędkość pompy do 1 mililitra na minutę. Jeśli perfuzja serca zakończy się powodzeniem, przepływ buforu w naczyniach włosowatych powinien być widoczny tuż pod nasierdziem.